中药复方制剂的小鼠抗炎试验

中药复方制剂的小鼠抗炎试验（共6篇）

1.中药复方制剂的小鼠抗炎试验 篇一

关键词：复方竹节参片,佐剂性关节炎,抗炎

复方竹节参片选用土家族名贵中草药竹节参 (为五加科植物竹节人参的干燥根茎) 为主药, 配以淫羊藿、白芍、穿山龙等, 经浓缩提取, 制备成的复方竹节参糖衣片剂型, 临床主要用于治疗类风湿关节炎、骨关节炎以及跌打损伤等各类风湿疼痛病症[1,2]。本文旨在研究复方竹节参片对小鼠佐剂性关节炎 (AA) 的治疗效果, 并观测AA小鼠血清细胞因子IL-6、IL-8、TNF指标的变化情况, 探讨其对小鼠实验性关节炎可能的作用机制及抗炎效果。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明种小鼠 (由湖北民族学院实验中心提供) , 共48只, 随机将其分为4组, 每组12只, 其中, 模型组 (A组) 体重 (17.14±1.15) g, 雷公藤多苷片对照组 (B组) 体重 (18.05±1.20) g, 复方竹节参片高剂量组 (C组) 体重 (18.14±1.17) g, 复方竹节参片低剂量组 (D组) 体重 (18.09±1.19) g。各组间体重等一般资料比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 器材

TL-16G型高速离心机 (上海实验仪器厂生产) ;精密电子分析天平;容积测量仪 (自制) ;GC-1200 r放射免疫计数器 (安徽科大创新公司生产) ;AXIOSKOP2PLUS光学显微镜 (德国ZEISS公司生产) 。

1.3 药品

复方竹节参片 (由湖北民族学院医学院附属医院制剂室提供, 批号:080915) , 制作方法:除去糖衣后粉碎, 加水煎制成1∶2的浓缩液后过滤, 于滤液中加入95%乙醇并搅拌, 冷藏24 h后再过滤, 回收乙醇溶液, 并浓缩至每毫升含生药2.0 g, 最后高压灭菌保存备用;雷公藤多苷片 (由湖北省黄石市制药厂生产, 批号:070, 每片含雷公藤多苷10 mg) ;弗氏完全佐剂;TNF、IL-8、IL-6试剂盒 (由中国人民解放军总医院科技开发中心放免所提供) 。

1.4 方法

所有实验小鼠均按0.1 ml/只于左后足跖皮内注射费氏完全佐剂致炎, 第8天开始灌胃给药, 每日1次, 连续21 d, 其中, 关节炎模型组 (A组) , 每只给予生理盐水0.200 ml, 阳性药雷公藤多苷片对照组 (B组) 给药剂量为0.020 g/kg, 复方竹节参片高剂量组 (C组) 给药剂量为6.000 g/kg, 复方竹节参片低剂量组给药剂量为3.000 g/kg。

1.5 小鼠佐剂性关节炎模型的关节炎指数分级[3,4]

关节炎指数由轻到重评价:没有红肿为0级;足小趾关节红肿为1级;趾关节和足跖部都红肿为2级;踝关节以下均红肿为3级;包括踝关节全部红肿为4级。该实验从第一次免疫后的第7天开始, 每周评分1次。

1.6 指标测定方法[5,6]

足爪体积测量采用排水法。复方竹节参片对病变的抑制作用以足爪肿胀抑制率为依据。耳廓肿胀模型采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀, 阳性药采用地塞米松 (0.005 g/kg) 。病变小鼠外周血IL-8、IL-6、TNF浓度采用放免法测定。小鼠踝关节继发病变者, 摘取做病理切片。病理学光镜观察软骨破坏、骨侵蚀, 以及关节滑膜组织、炎性细胞浸润情况。

1.7 统计学方法

采用SPSS for Windows 10.0软件对试验数据进行统计学分析, 计量资料数据以均数±标准差表示, 采用t检验。计数资料以率表示, 采用χ2检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 病理测定结果

A组:踝关节骨质疏松, 滑膜充血、水肿呈不规则增厚, 表面可见灶性坏死。踝关节发生明显病变者, 可见关节软骨毛糙甚或缺损改变, 软骨细胞发生固缩, 重者甚至形成软骨空陷窝。滑膜内可见大量中性粒细胞、浆细胞、淋巴细胞和巨噬细胞浸润;B组、C组及D组:踝关节未见明显病理改变, 关节软骨面光滑, 仅见少量炎性细胞浸润, 滑膜细胞轻度增生, 但细胞排列整齐, 形态规则。

2.2 复方竹节参片对佐剂性关节炎小鼠足踝关节肿胀的影响

致炎后第2天, C组与D组足肿胀程度低于A组 (P<0.05或P<0.01) 。与雷公藤多苷片相比, 大剂量复方竹节参片更能抑制关节肿胀, 表明大剂量复方竹节参片对佐剂性关节炎小鼠原发病变的防治效果更显著, 并且优于雷公藤多苷片, 而低剂量组各时段对AA小鼠的影响不明显。见表1。

注:与A组比较, *P<0.05;**P<0.01;与B组比较, △P<0.05。

2.3 复方竹节参片对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

复方竹节参片同地塞米松一样, 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀具有明显的抑制作用, 且复方竹节参片剂量越大, 抑制作用越明显。见表2。

2.4 复方竹节参片对佐剂性关节炎模型小鼠外周血细胞因子的影响

A组小鼠血清中TNF、IL-6、IL-8水平与B组、C组、D组比较明显升高 (P<0.05或P<0.01) 。灌服复方竹节参片或雷公藤多苷片一周后, 病变小鼠血清中IL-6、IL-8水平降低 (P<0.05) 。

注:与A组比较, **P<0.01;与D组比较, ΔP<0.05

注:与A组比较, *P<0.05, **P<0.01;与B组比较, ΔP<0.05

3 讨论

类风湿性关节炎 (RA) 是以全身多处关节对称性慢性增生性滑膜炎症为特征的免疫性疾病。以侵犯关节囊和关节软骨为主而致关节强直畸形。弗氏完全佐剂诱导的小鼠关节炎病理特征和人类风湿性关节炎相似。复方竹节参片治疗类风湿性、风湿性关节炎和骨质增生性、损伤性关节炎等[1]效果显著, 具有通络止痛、益气活血、温肾壮骨、祛风除湿的功效。复方竹节参片以竹节参为主要成分, 闵静[4]通过动物试验证实竹节参通过降低血中炎性因子而起到明显的抗炎作用。本试验表明复方竹节参和雷公藤片都能显著改善实验小鼠佐剂性关节炎的肿胀程度, 降低其关节炎指数, 两组比较差异不显著。细胞因子为免疫细胞间的联络“信使”, 维持免疫细胞功能的协调运转。本研究结果显示, 病变小鼠外周血中的TNF、IL-6、IL-8水平显著升高, 复方竹节参片能显著抑制TNF、IL-6、IL-8的释放, 从而有助于抗炎因子和促炎因子间的平衡[7,8], 对降低组织破坏和减轻炎症反应有积极作用。同时复方竹节参片与雷公藤多苷片一样能有效改善试验小鼠佐剂性关节炎炎性细胞浸润, 降低炎症因子对软骨和骨的侵蚀破坏, 显著改善AA小鼠的病变发展, 同时, 还能抑制IL-6、IL-8、TNF炎症因子的病理性升高。

参考文献

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2.关于中药复方制剂制备工艺的研究 篇二

【关键词】中药复方制剂；制备；工艺

【中图分类号】TQ46

【文献标识码】A

【文章编号】1672—5158（2012）10-0354-01

1　组方认识

对于一个复方新药，为了使其工艺路线的设计避免盲目性，可从4方面对其组方进行分析：（1）以中医药理论作指导，了解组方的君、臣、佐、使。对一则组方不应局限在用中医理论进行论述，不应拘泥于强分君、臣、佐、使，而应以固定的组织结构和流动的气血津液，以及病因病机为着眼点进行分析。（2）了解组方药味的传统用法、有毒无毒，以及复方中各单味药有效成分的关联性。（3）了解组方中各味药的性味归经、功能主治，确认各味药的炮制与否、炮制的目的与方法。（4）检索文献，了解各药味所含化学成分及其理化性质以及方中各药味的药理作用，特别注意与本组方的功能主治相关的药理作用。如麻黄汤中组方4味药，以麻黄与桂枝有发汗作用，杏仁和甘草无发汗作用，麻黄中起发汗作用的成分有麻黄碱、伪麻黄碱，桂枝中有桂皮醛。

2　剂型的选择

选择剂型时要考虑以下几方面因素：（1）根据临床需要，例如治疗急症、重症的，注射剂当属优选剂型。例如陈达仁等用川芎注射液静脉滴注治疗急性脑梗塞有明显疗效。（2）根据药物的理化性质、以及药物在体内的代谢过程设计最佳剂型，例如挥发油成分易挥发，当挥发油含量较多时，如若制成片剂则易发生泛油、裂片现象，从而直接影响药物的质量稳定性，因此可以考虑制备成其他的固体分散剂如滴丸；某些药物口服时，其在体内代谢过程中对肝肾功能易造成损伤，那么应当考虑其他给药途径。如将附子理中方的丸剂改为缓控释片剂，使药物缓慢、近似恒速释放，克服药物在体内的峰谷现象，从而降低了药物的毒性，提高用药的安全有效性。（3）根据用药对象，老人与小儿用药应尽可能选择易于服用的剂型，比如口腔速溶片、口服液。（4）根据病症选择适宜的剂型。（5）其他因素，药物的味道，服用方便与否、组方剂量的大小等都应在剂型选择考虑范围内。

3　制备工艺的确定

中药复方有效成分复杂，对某一组方新药制备工艺的要求主要是尽量多地提取有效成分，同时又最大限度地除去杂质，尽可能使制剂内的有效部分含量高、生物利用度好、治疗剂量小、质量稳定和可控性强、安全度高及使用方便等。

3.1　提取工艺研究

中药提取工艺对保障中药制剂的内在质量、临床疗效最为关键。中药提取的基本方法为浸渍法（常温浸渍法、温浸法、煎煮法）、渗漉法、回流法，其中水煎煮法是最常用的符合传统习惯的方法，但传统的汤剂煎煮法有效成分损失较多，尤其是水不溶性成分和挥发性成分。

对于提取工艺路线的设计，组方分析是基础。由于中药复方成分非常复杂，同一药材在不同复方中可能作用不同。因此，在工艺设计前应先根据组方的功能主治，针对每味中药在组方中君臣佐使的地位，查阅文献分析其所含的有效成分、药理作用，充分考虑其合理性，再根据提取原理和预实验的结果，选择适宜的提取工艺路线。应先醇提再水提，缩短了丹参酮类成分的受热时间，提高了丹参酮类的提取转移率。确定提取工艺路线后，应对工艺的技术参数进行筛选对比，如正交法、均匀设计法等。优选时必须要以有效成分或主要化学成分为控制指标，不能采用一些无关紧要的控制指标（如出膏量等）。

3.2　分离与纯化工艺研究

现在，对中药提取物进行分离、纯化、精制的方法有絮凝沉淀法、膜分离法，大孔吸附树脂法，超临界萃取法以及超滤技术等类型，虽然能克服中药制剂剂量大、辅料量大的缺点，但应用推广面因素的影响。究竟采用哪种方法，必须根据药性，经试验研究后确定，一种方法无法解决所有药物的问题，每种方法均有其优缺点，如膜分离技术具有可常温下操作、分离时无相变化、可分离不同分子量溶质等优点，利于保持中草药有效成分的生物活性、物理和化学稳定性，尤适用于受热有效成分易破坏的、保味性和对化学物质有反应的中草药制剂；并有去除溶液中各种微粒胶体、细菌和热原的作用，在中草药制剂特别是注射剂的制备中倍受青睐。但是，在中药复方制剂生产中，将膜分离技术放大至工厂生产还不能成为现实；此外复方制剂成分复杂多样，有效成分与杂质用该法不易分离；膜易被污染，使用寿命短，且换膜不方便。大孔吸附树脂虽然在中药有效成分提取、富集中有其独特的优势和作用，但应当充分考虑大孔吸附树脂使用的安全性，要注意二乙烯苯泄漏量、微生物（细菌）量及有机残留量。

3.3　制剂成型研究

制剂成型研究是复方新药制剂制备工艺研究中最后而又十分重要的环节，它包括制剂处方设计和成型工艺设计。

制剂处方设计是根据剂型的特点、药物性质，设计不同的辅料配方（包括辅料组成和用量），通过模拟生产条件（如温湿度），使用相应的制剂设备进行筛选最优配方的过程。其目的在于解决制剂[FS：PAGE]的成型性、有效性、安全性、稳定性与使用方便。设计的制剂处方能否使药物成型，成型后是否稳定，分剂量是否准确，含量是否均匀，能否崩解、释放、充分发挥药效等，这些均为制剂处方设计中应要注意的质量问题，也是筛选辅料的主要依据。一般应首先研究半成品与制剂成型性、稳定性，然后有针对性地选用辅料，以解决制剂在成型性与稳定性方面存在的问题。黄世福等根据组方剂量和工艺提取率，以吸湿率和流动性为指标，筛选出消炎利胆胶囊的最佳辅料和制剂成型工艺。

制剂成型工艺是药物半成品与辅料加工处理，最后形成产品的过程。其重点在成型工艺路线的选用、药物与辅料的加工处理方法与方式、成型设备的选择与应用。不同的剂型其成型工艺迥然不同，在制剂成型工艺研究过程中应注意半成品的理化性质决定着成型工艺路线，而不同工艺路线辅料的组成、用量亦有差别。因此，制剂处方设计研究应与成型工艺研究相结合，优选出最佳辅料组成和用量。例如冻干法制备口腔速溶片，辅料多为糊精、甘露醇、甘氨酸（防塌剂）、阿拉伯树胶、十二烷基硫酸钠等；而用于压法制备口腔速溶片，辅料多为乙醇、聚乙烯吡咯烷酮，以及糖类及其衍生物等。

3.4　大生产可行性研究

由于实验室受条件限制，样本量小，代表性相对较差，与生产会有一定差距，因此利用中试试验研究，调整工艺路线和技术参数，为设备选型提供依据。例如制备硬胶囊剂，若选用自由流动型填充机，而物料流动性差者，则应考虑采用制粒成型工艺；若选用螺旋钻压进式填充机，因机械往复运动，挤压式充填，能避免分层和充填不均现象，只要物料混合均匀，也可用直接填充。中试规模应达到处方量的10倍以上，这里所说的不是1日处方量，是以出成品1000个单位计算的处方量。提供至少3批中试生产及检测数据，包括批号、投料量、半成品量、辅料量、成品量、成品率。

3.中药复方制剂的小鼠抗炎试验 篇三

1 材料

1.1 试验动物

体重为22～25 g的ICR雄性健康小鼠, 购自北京市实验动物中心, 常规饲养, 自由采食和饮水, 每日光照时间为12 h, 备用。

1.2 药品与试剂

黄芪、白术、淫羊藿等饮片, 购自河北省安国中药市场。中药加水文火煎熬2次, 每次30 min, 用8层纱布过滤, 合并滤液, 浓缩至1∶1 (即1 mL煎液相当于原生药1 g) , 备用。氢化可的松 (hydrocortisone, Hy) , 规格为10 mg/2 mL, 由天津药业焦作有限公司生产;“一得阁牌”碳素墨汁 (批号为0709153) , 用前用滤纸过滤, 5倍稀释后备用。

2 方法

2.1 试验设计与分组

从预备饲养的小鼠中取50只, 随机分为5组, 即正常生理盐水对照 (NS) 组、氢化可的松+生理盐水 (NS+Hy) 组、氢化可的松+低剂量给药 (L+Hy) 组、氢化可的松+中剂量给药 (M+Hy) 组、氢化可的松+高剂量给药 (H+Hy) 组, 每组10只。后4组用氢化可的松腹腔注射造模, 用药组于造模结束后的次日开始灌服给药;低、中、高剂量组每只小鼠分别灌服中药复方煎剂0.2 mL、0.4 mL和0.6 mL, 正常生理盐水对照组和氢化可的松+生理盐水组每只小鼠灌服生理盐水0.4 mL。各组小鼠于给药6 d后处死, 进行脾脏指数、胸腺指数以及碳粒廓清指数的测定。具体分组及给药情况见表1。

2.2 免疫器官指数的测定

末次用药24 h后, 眼眶放血处死小鼠。用分析天平精密称量体重, 摘取脾脏和胸腺并称重, 计算脾脏指数 (脾脏重/体重) 和胸腺指数 (即胸腺重/体重) 。

2.3 碳粒廓清指数的测定

末次用药24 h后, 按体重0.01 mL/g给小鼠尾静脉注射处理后的碳素墨汁, 注射后2, 10分钟用肝素处理过的微量吸管分别从小鼠眶后静脉丛取血20 μL, 溶于2 mL 1 g/L的Na2CO3溶液中, 摇匀, 于波长650 nm处测定吸光度值, 计算廓清指数 (K) 和校正廓清指数 (α) 。K= (lgA1-lgA2) / (t2-t1) ;α=K/3×[体重/ (肝脏重+脾脏重) ], 式中:lgA1和lgA2分别指2 min后所测得的吸光度值的对数, t2-t1指测量两次吸光度值所用的时间差。

2.4 统计学分析

应用SPSS13.0统计软件对各组试验数据进行差异显著性检验, 并进行分析。

3 结果与分析

3.1 中药复方煎剂对免疫抑制小鼠脾脏指数和胸腺指数的影响 (结果见表2)

由表2可知, 氢化可的松造模组小鼠脾脏指数和胸腺指数 (P<0.01) 均较正常小鼠明显降低。灌服中药复方煎剂后可不同程度提升免疫抑制小鼠的上述指标。其中, 与NS+Hy组比较, 中、高剂量组小鼠的脾脏指数和胸腺指数 (P<0.01) 均回升;与NS组比较, 3个剂量组均基本恢复至正常。

注:与NS+Hy组相比, **表示差异极显著 (P<0.01) ;与NS组相比, A表示差异极显著 (P<0.01) 。

3.2 中药复方煎剂对小鼠碳粒廓清指数的影响 (结果见表3)

注:与NS+Hy组相比, **表示差异极显著 (P<0.01) , *表示差异显著 (P<0.05) ;与NS组相比, a表示差异显著 (P<0.05) 。

由表3可知, 与NS组比较, 氢化可的松造模组小鼠的碳粒廓清指数显著下降 (P<0.05) 。当灌服中药复方煎剂后, 各用药组小鼠的碳粒廓清指数均较NS+Hy组有不同程度的回升。其中, 中剂量组回升显著 (P<0.05) , 高剂量组回升极显著 (P<0.01) , 且已超过正常水平。

4 讨论

高效安全的免疫调节剂是当前医学和生物学领域研究的重要课题[3,4,5]。本研究是在对常用中草药有效成分定性定量分析的基础上, 筛选了含有激活免疫系统和活化免疫细胞的多糖、皂甙、黄酮等有效成分的黄芪、淫羊藿、白术等中草药, 依据现代中兽医医药理论, 科学配伍组成复方制剂, 通过给小鼠灌服不同剂量的复方制剂来探讨该复方制剂对免疫抑制小鼠的免疫增强作用。

黄芪、淫羊藿中所含的多糖类及皂甙类物质具有补气升阳、促进巨噬细胞吞噬的作用, 本试验结果显示中、高剂量组均可不同程度提高或恢复免疫抑制小鼠的脾脏指数、胸腺指数及碳粒廓清指数, 说明该中药复方制剂可提高机体的非特异性免疫功能。许多前人的报道也证实了这一点, 史万玉等[6]研究发现, 一定剂量的黄藿散可显著提升免疫抑制小鼠的脾脏指数、胸腺指数及碳粒廓清率;徐明等[7]研究发现, 黄芪总提物 (TAE) 可显著对抗环磷酰胺引起的脾脏指数和胸腺指数的降低, 黄芪能明显提高或恢复免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用。

参考文献

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4.中药复方制剂的小鼠抗炎试验 篇四

1.1 材料中药制剂由薄荷、冰片、石青、柴

胡、黄琴、野菊花、合欢花、川芍、甘草、苏木、秦九等组成, 研细后按0.2%拌入日粮饲喂。

1.2 试验日粮

预混料由微量元素和维生素等组成。

1.3 试验动物及分组情况选用10日龄, 体

重相近的AA肉鸡600羽, 采用单因子试验设计, 随机分为2组, 即试验组和对照组, 每组设3个重复, 每个重复100羽。根据生产实际设计配方, 基础配方相同, 试验组在对照组的基础上添加上述复方中药制剂。试验至30日龄结束, 试验期20 d。

1.4 饲养管理

半开放式鸡舍, 试验鸡采用网上平养, 按生产实际保持每平方米约40只AA肉鸡, 采用微流水水槽供水, 自由采食, 自由饮水, 按常规管理进行疫苗注射和冲洗圈舍。饲喂顺粒饲料。每日均人工投料, 在前期由于肉鸡的采食量较小, 每天投料1次;在后期由于肉鸡采食量增加, 每天投料2次。免疫接种由鸡场工作人员按常规进行。各组均给予相同的饲养管理和环境条件。在试验中, 有试验鸡发病, 在不影响试验结果的条件下依常规处理, 同时做好相应记录。每天记录试验肉鸡的采食量、粪便变化及活动情况。

1.5 记录指标

1.5.1 增重及日增重10日龄时对试验鸡逐

个测定个体初重, 饲养至30日龄时, 以重复组为单位对鸡群进行空腹称重, 计算日增重。

1.5.2 死亡率每天记录各组的死亡肉仔鸡数, 统计试验期间各组的死亡率。

1.5.3 度泻率每天记录腹泻肉仔鸡数, 统计试验期间各组的腹泻率。

1.5.4 试验统计以重复组为单位, 计算平均

体重、日增重、料重比 (耗料量/增重) 、采食量、粪便情况、死亡率、鸡的安静程度等。

2 结果与分析

2.1 不同剂量的中药复方制剂对肉仔鸡生长性能的影响

在7、14、21、32和43日龄对肉鸡生长性能的测定中, 0.1%剂量组的生长性能指标均优于0.2%剂量组, 0.2%剂量组好于对照组, 说明按照0.1%和0.2%的剂量向饲料中添加肥鸡旺均能够起到促进肉鸡生长, 提高饲料转化率的作用, 而0.1%的肥鸡旺能够更好的提高肉鸡的增重效果。这可能是由于0.1%的剂量不仅提高了饲料的适口性, 而且能够更好的发挥补中益气, 健脾益肺, 健胃消食, 促进采食的作用, 更好的均衡饲料中的营养平衡;而0.2%的剂量组虽然效果要好于对照组, 但其饲料转化率低于0.1%剂量组, 这可能是由于中药的药效与其剂量呈倒钟状关系, 即低于最佳剂量时药效与剂量成正相关, 高于最佳剂量时药效与剂量成负相关[2], 因此0.2%的添加剂量可能对饲料中的营养平衡产生了一些不利影响, 从而造成了0.2%剂量组的效果较0.1%剂量组差些。同一行标记不同字母代表存在显著差异 (P<0.05) , 相同字母代表差异不显著 (P>0.05) ;在饲养后期即30日龄到出栏前, 鸡群不同程度的患病。虽然治疗及时没有造成大的损失, 但是在恢复过程中能量消耗比较大, 对鸡只的增重产生了一定的影响。由于肥鸡旺发挥了增强机体抵抗力并且具有促进采食的功效, 因而在这段时间0.1%剂量组和0.2%剂量组增重效果虽然因患病受到影响但仍优于对照组。

2.2 经济效益分析

对该肉鸡生长试验进行经济效益分析, 试验组和对照组相比较, 0.1%剂量组较对照组每只鸡的经济效益高出1.04元;0.2%剂量组较对照组每只鸡经济效益高出0.89元;可见0.1%剂量组和0.2%剂量组经济效益均明显高于对照组, 且0.1%剂量组效益最佳。

3 小结

3.1 在肉鸡日粮中加入不同剂量的中药制

剂, 都不同程度地促进了肉鸡的生长发育, 提高了日增重, 降低了料重比。在肉鸡日粮中添加0.1%、0.2%的中药制剂均能明显提高增重、饲料转化率和经济效益。

3.2 复方中药制剂不仅能解决抗生素及其

替代品不能解决的药物残留问题, 而且添加于饲料中能改善饲料味道, 提高饲料适口性, 增强畜禽肠道分泌, 有利于消化吸收, 发挥补中益气, 健脾益肺, 健胃消食, 促进采食的作用, 提高饲料报酬, 因而有利于提高肉鸡生长性能。

3.3 中草药制剂可提高肉鸡的抗病能力和

生长性能, 但也存在许多问题, 主要是产品生产工艺落后, 设备简陋, 加工粗糙, 品种单一, 使用剂量偏大, 通常都在1%~2%, 有的竟高达5% (如松针粉) , 这不仅增加了产品成本, 浪费药物, 而且也影响了饲料的营养配比和适口性。

4 讨论

4.1 中草药添加剂对肉仔鸡生长性能

中草药添加剂具有多种营养成分和生物活性物质, 在促进肉仔鸡生长, 提高增重和饲料报酬方面具有显著作用。张凤台等 (1994) 报道, 添加1%由黄蔑、当归、陈皮、麦芽组成的中草药, 肉鸡增重提高6.0%-8.6%, 饲料节约4.7%-4.9%;满展等 (1997) 用黄柏、板蓝根、大蒜等十味中草药和中草药发酵制剂, 按一定比例配制添加在肉仔鸡日粮中, 结果表明中草药添加剂组的增重、成活率高于对照组。本试脸结果也证明, 复方中药制剂在肉鸡生产中应用能提高肉鸡的体增重, 与对照组相比, 添加中药组的体重提高8.1%, 试验组平均个体重比对照组高出100 g以上, 试验组的料重比还比对照组下降0.16。这说明复方中药制剂能提高肉仔鸡的体重, 降低料重比, 提高肉仔鸡的生产性能。

4.2 复方中药制剂对肉鸡的抗热应激作用

由于鸡缺乏汗腺, 不能通过发汗的方式散热, 只能通过调节体温中枢和镇静催眠作用来抗热。该方中石青、柴胡、黄琴、野菊花等具有调节体沮中枢的作用, 苏木、冰片、合欢花等具有镇静催眠作用;秦芜、薄荷具有发汗抗热功能, 甘草调和诸药而达到抗热应激的作用。

摘要：随着畜牧业规模化、集约化的发展, 使得畜禽面临着越来越多的应激因素, 包括环境应激、营养应激、心理应激等, 导致畜禽应激综合症的发生, 畜禽表现出采食量下降、生产性能降低、发生代谢性疾病等症状。特别是季节交替之际, 温湿度变化大以及高温季节动物饲养密度较大时, 动物应激问题尤为突出。本试验在夏季采用较高密度饲养的生产方式, 研究热应激条件下复方中药制剂对肉鸡生长性能的影响。

关键词：肉鸡,使用,复方中药制剂

参考文献

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[5]刘凤华, 谢仲权.抗热应激中草药添加剂进展[J].中兽医医药杂志, 1999 (1) :17-18.[5]刘凤华, 谢仲权.抗热应激中草药添加剂进展[J].中兽医医药杂志, 1999 (1) :17-18.

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5.中药复方制剂的小鼠抗炎试验 篇五

1 材料与方法

1.1 中药复方

将当归40 g、川芎40 g、桃仁20 g、红花20 g、益母草60 g、炮姜20 g、甘草15 g (以上中药购自青海大学农牧学院动物医院) 、红糖 (市购) 100 g、黄酒 (市购) 50 mL、牦牛胎盘 (采自青海省海西州天峻县) 20 g水煎, 过滤出的药液在电炉上浓缩至500 mL。

1.2 试验动物分组及处理

6～8周龄昆明种小鼠60只, 雌雄各半, 由青海地方病研究所实验动物中心提供。常规饲养3 d, 观察无异常后备用。将小鼠随机分为D-半乳糖药物组、D-半乳糖对照组和对照组, 每组20只。D-半乳糖药物组和D-半乳糖对照组小鼠背部皮下注射D-半乳糖0.15 mL/d, 对照组注射生理盐水0.2 mL/d;D-半乳糖药物组口腔灌服中药复方0.2 mL/d, D-半乳糖对照组和对照组灌服生理盐水0.2 mL/d;15 d后脱颈椎处死所有小鼠, 取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏备用。

1.3 试剂

D-半乳糖 (批号为080711) , 购自上海蓝季科技发展有限公司;SOD试剂盒 (批号为091231) 、MDA试剂盒 (批号为091231) , 均购自南京建成生物工程研究所。

1.4 组织匀浆的制备

取小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏各0.3 g制成10%组织匀浆, 备用。

1.5 SOD活性和MDA含量的测定

按照试剂盒说明分别测定衰老小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中SOD活性和MDA含量。

1.6 统计学分析

应用SPSS统计软件对试验数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 中药复方对衰老小鼠体重的影响

给药前分别称取各组小鼠体重, 15 d后再分别称取各组小鼠体重, 结果15 d后D-半乳糖药物组和对照组与D-半乳糖对照组相比差异显著 (P<0.05) , 给药前后各组小鼠体重变化结果见表1。

注:同列数据肩标字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

2.2 中药复方对衰老小鼠部分组织中SOD活性的影响 (结果见表2)

注:同列数据肩标小写字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 大写字母不同表示差异极显著 (P<0.01) , 字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表2可知, 与D-半乳糖对照组比较, 除了肾脏外, 中药复方都能提高衰老小鼠其他组织中SOD的活性 (P<0.05或P<0.01) 。

2.3 中药复方对衰老小鼠部分组织中MDA含量的影响 (结果见表3)

注:同列数据肩标小写字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 大写字母不同表示差异极显著 (P<0.01) , 字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表3可知, 与D-半乳糖对照组比较, 除了肾脏外, 中药复方都能降低衰老小鼠其他组织中MDA含量 (P<0.05或P<0.01) 。

3 讨论

以D-半乳糖制备亚急性衰老模型的方法是目前国际上公认的建模方法[8], 该模型使机体细胞内半乳糖浓度增高, 在醛糖还原酶催化下还原成半乳糖醇。这种物质不能被细胞进一步代谢而堆积在体内影响正常渗透压, 导致细胞代谢紊乱, 破坏机体抗氧化防御系统使自由基积聚, 导致衰老[9,10]。在衰老机制研究中, 超氧自由基学说已受到广泛的关注, 在动物衰老的过程中, 体内超氧自由基含量不断增多、机体自身的抗氧化系统活性降低是机体衰老的主要原因之一[11,12]。

6.中药复方制剂的小鼠抗炎试验 篇六

1 材料与方法

1.1 药物与试剂

复方中药补益方[西洋参 (1.5g/天) 、管花肉苁蓉醇提喷粉 (1.5g/天) , 破壁灵芝孢子粉 (0.5g/天) , 大豆肽 (0.5g/天) ], 人每日总用药量为4g, 根据人临床拟日用量, 设小鼠低、中、高剂量分别为0.30、0.6、1.2g/kg。正韩高丽参 (以下简称高丽参) , 正韩香港国际集团有限公司提供, 生产批号:FHS0090319, 高丽参加蒸馏水旋转蒸发浓缩至1g生药/ml的浸膏, 蒸馏水稀释成混悬液, 4℃保存备用。

肝糖原检测试剂盒、TNF-α检测试剂盒、I FN-γ检测试剂盒 (进口分装) 均由广州普天达盛生物科技有限公司购进。戊巴比妥钠, 25g/瓶, 进口分装。

1.2 仪器

AB104S型电子天平、PL3001-S型电子天平, 瑞士METTLER TOLEDO;M1000型连续波长多功能酶标, 瑞士Tecan;985370型组织匀浆器, 美国Biospec;YSI1500乳酸测定仪。

1.3 动物分组与给药

SPF级昆明 (KM) 小鼠 (由广州中医药大学实验动物中心提供, 实验动物生产许可证号为:SCXK (粤) 2008-0020) 150只, 雌性各半, 随机分为5组, 分别为对照组 (蒸馏水) 、复方中药补益方低 (0.3g/kg) 、中 (0.6g/kg) 、高 (1.2g/kg) 剂量组、阳性对照高丽参组 (0.2 ml/10g) 。各组灌胃给药1次/天, 共28天。

1.4 复方中药补益方抗小鼠体力疲劳实验

1.4.1 负重小鼠游泳时间的测定

每组随机取10只小鼠 (雌性各半) , 末次给药后3小时小鼠尾部束一5%体重的重物, 将小鼠投入游泳装置 (水深30cm, 水温调节至30±1℃) 进行游泳试验。记录小鼠自游泳开始至衰竭的时间 (观察小鼠鼻孔沉入水中10秒不能浮出水面者即为体力耗竭) , 作为小鼠游泳时间。

1.4.2 游泳小鼠乳酸、肝糖元的测定

每组随机取10只小鼠 (雌性各半) , 末次给药3h后以毛细管内眦采血20μL加入40μL破膜液振荡, 后小鼠不负重在30℃水中游泳10分钟, 立即采血20μL加入40μL破膜液振荡;休息20分钟后再次采血20μL加入40μL破膜液中振荡。乳酸仪测定血乳酸, 计算血乳酸曲线下面积。

血乳酸曲线下面积计算方法:血乳酸曲线下面积=1/2× (游泳前血乳酸值+游泳后0分钟的血乳酸值) ×10+1/2× (游泳后0分钟的血乳酸值+游泳后休息20分钟的血乳酸值) ×20=5× (游泳前血乳酸值+3×游泳后0分钟的血乳酸值+2×游泳后休息20分钟的血乳酸值) 。

末次取血后处死动物, 冰台上取肝脏经生理盐水漂洗、滤纸吸干后置于平皿内, 称取肝脏100mg, 蒽酮法测定肝糖原含量。

1.5 复方中药补益方对小鼠免疫调节试验:

每组取昆明10只小鼠, 雄性, 除正常组外其余各组小鼠于试验第1、4、8、11、15、18、23天腹腔注射环磷酰胺 (35mg/kg) 制备免疫低下模型。

1.5.1 ELISA法检测血清中TNF-α, IFN-γ含量、免疫器官质量法检测免疫指标

小鼠从造模开始灌胃给药, 连续28天, 末次给药3小时后眼静脉丛取血, 1500r/分钟离心5分钟, 分离血清。ELISA法按试剂盒操作说明检测血清TNF-α, IFN-γ含量。颈椎脱臼处死动物, 取胸腺、脾脏称重, 计算胸腺指数和脾指数。

1.5.2 MTT法检测小鼠淋巴细胞增殖水平

末次给药3h处死动物后, 无菌取脾, 制备5×106/ml脾细胞悬液, 加至lml/培养孔, 3个复孔, 试验孔加75ul ConA, 对照孔不加ConA。于5%CO2、37℃培养箱中培养72小时。培养结束前4h吸弃上清0.7 ml后加入0.7ml不含胎牛血清的RPMll640培养液, 同时加入MTT 50ul, 继续培养至72小时。然后每孔加入再l ml 3%SDS, 吹打混匀至紫色结晶完全溶解, 于570nm波长处测定A值。

1.5.3 对小鼠NK细胞活性实验的影响 (LDH法)

脾细胞悬液 (效应细胞) 的制备, 按1.5.2方法。最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/ml。NK细胞活性检测:取浓度为4×105个/ml的YAC-1靶细胞和效应细胞各100ul (效靶比50:1) 加入U型96孔培养板, 靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100ul, 靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100ul, 上述各项均设3个复孔, 于37℃、50%CO2培养箱中培养4小时, 然后将96孔培养板以1500r/分钟离心5分钟, 每孔吸取上清100ul置平底96孔培养板中, 同时加入LDH基质液100ul反应3分钟每孔加入1mol/L HC1 30ul, 用酶标仪在492nm测定A值, 并按公式计算样品的NK活性:

1.6 数据处理

结果以±s表示, 采用SPSS 17.0统计软件进行单因素方差分析和χ2检验, 以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 复方中药补益方对小鼠负重游泳时间的影响

与对照组比较, 各给药组小鼠游泳时间均延长, 其中复方中药补益方中、高剂量组和阳性对照组均有显著统计学意义 (P<0.05或0.01) , 见表1。

注:与对照组比较:aP<0.05, bP<0.01.

2.2 复方中药补益方对游泳小鼠乳酸以及肝糖元的影响

与对照组比较, 复方中药补益方高剂量组和高丽参组游泳后0分钟的血乳酸值明显降低 (P<0.05) , 复方中药补益方中、高剂量组和高丽参组游泳后休息20分钟血乳酸值明显降低 (P<0.05或P<0.01) , 复方中药补益方高剂量组和高丽参组血乳酸曲线下面积均小于对照组 (P<0.05) 。复方中药补益方中、高剂量组和高丽参组肝糖原明显增加 (与对照组比P<0.05或P<0.01) 。见表2。

2.3 对免疫低下小鼠免疫功能的影响

与模型组比较, 复方中药补益方各剂量组和阳性对照组均能明显增强小鼠淋巴细胞转化能力 (P<0.05或P<0.01) ;复方中药补益方中、高剂量组和阳性对照组NK活性 (%) (P<0.05) 。见表3。

2.4 复方中药补益方对免疫低下小鼠胸腺指数、脾指数及血清TNF-α、IFN-γ含量的影响

与模型组比较, 复方中药补益方高剂量组脾指数明显增加 (P<0.05) ;中药补益方中、高剂量组、高丽参组血清TNF-α和IFN-γ含量明显增加 (P<0.05或P<0.01) 。见表4。

3 讨论

疲劳属中医“虚损”范畴, 是因体质虚弱、积劳内伤、形神过耗、元气亏损、脏腑机能衰退、气血生化不足所致。遵循中医“虚则补之”、“损者益之”、“气血双补”的治疗原则[3,4], 复方中药补益方选取西洋参、管花肉苁蓉、破壁灵芝孢子粉、当归这4种中国卫生部批准具有抗疲劳功能的药物进行复方研究[5]。中药复方是中医药学宝库中的精华之一, 是中医临床使用最广泛的形式, 是中医辨证论治的具体体现, 是中医药理论“理法方药”的重要环节, 是中医治疗疾病的主要措施之一。现代药理学研究表明, 西洋参具有补气养阴、清热生津、抗疲劳、提高免疫力、促进血液活力的作用;管花肉苁蓉有温补肾阳、益精血、强身延年、增强免疫功能、对阳虚证有增强体力、抗疲劳之功效;灵芝有保神益精、益心气、补中增智功效;当归有补血活血、抗心肌缺血、抗炎镇痛、抗疲劳的功效[6,7,8]。大豆肽可显著提高小鼠免疫器官指数, 增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性, 激发小鼠抗鸡红细胞抗体的产生[9]。本研究基于中医理论探索中药复方抗疲劳、调节免疫的作用机理。

注:与正常对照组比, aP<0.01;与模型对照组比较:bP<0.05, cP<0.01.

本研究结果表明, 复方中药补益方可延长小鼠游泳时间, 有提高小鼠机体抗疲劳的作用;糖原是运动能量的重要来源, 糖原的储存量可以直接影响机体的运动能力, 提高糖原储备量有助于提高耐力和运动能力, 抵抗疲劳。乳酸堆积是机体疲劳的原因之一, 在肌肉收缩初始和剧烈收缩时, 氧供应有限, 仅靠有氧氧化不能满足能量的需求, 必须加速糖酵解的供能, 因而在无氧情况下, 肌肉通过糖酵解反应得到能量的同时, 也产生大量乳酸, 使肌肉中乳酸浓度上升, pH值下降, 导致疲劳发生。血乳酸作为肌肉活动的主要代谢产物, 是评价机体疲劳的重要标志[10]。本研究发现, 与对照组比较, 试验组血清血乳酸、肝糖原含量显著提高。

注:与对照组比较a为P<0.05, b为P<0.01.

注:与正常对照组比, a为P<0.01;与模型对照组比较:b为P<0.05。

免疫因子与疲劳症状、免疫功能紊乱关系密切[11], 疲劳患者可出现免疫功能下降, T细胞和B细胞是机体免疫系统内功能最重要的免疫细胞, 胸腺和脾腺是机体的重要免疫器官。所以T细胞、B细胞、胸腺指数和脾脏指数是反映机体免疫状态的重要指标。机体免疫功能下降会导致机体防御、识别及排除外来病原微生物和自身产生的抗原性异物的能力下降, 从而难以维持机体内环境生理平衡, 导致疾病产生。本研究结果表明, 复方中药补益方显著增加免疫低下小鼠胸腺指数, 显著刺激巨噬细胞分泌TNF-α, 使其吞噬能力增强。IFN-γ是单核巨噬细胞的强激活剂, 是体内细胞因子网络的重要组成部分[12], 在免疫调节方面起重要作用, 它的活性水平, 可以反映出整个机体免疫功能的状态。本研究发现试验组的血清IFN-γ与模型组相比显著增强, 提示复方中药补益方能显著改善免疫低下症状。

本研究结果表明, 经口给予小鼠不同剂量的复方中药补益方4周后, 与模型组比较, 该受试物能够明显增强小鼠Con A诱导的脾淋巴细胞转化和NK细胞活性。表明复方中药补益方能够增强机体抗疲劳和免疫功能, 但关于进一步作用机制尚有待深入研究。

摘要：目的 探讨复方中药补益方对小鼠抗疲劳及免疫调节的作用。方法 SPF级小鼠随机分为对照组 (蒸馏水) 、复方中药补益方低 (0.30g/kg) 、中 (0.60g/kg) 、高剂量组 (1.2g/kg) 及阳性对照高丽参组 (0.2ml/10g) , 灌胃给药1次/天, 持续28天。通过检测小鼠负重游泳时间、不负重血乳酸、肝糖元评价复方中药补益方抗小鼠疲劳作用;腹腔注射环磷酰胺建立小鼠免疫功能低下模型, 通过测定脾淋巴细胞转化和NK细胞活性、ELISA法检测血清中TNF-α、IFN-γ含量, 观察复方中药补益方对免疫低下小鼠的调节作用。结果 复方中药补益方能明显廷长小鼠游泳时间、降低血乳酸值、增加肝糖原含量;明显提高环磷酰胺致免疫低下小鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量, 增加脾指数;明显增强免疫低下小鼠脾淋巴细胞转化和NK细胞活性。结论 复方中药补益方具有增强小鼠抗疲劳能力和免疫功能的作用。