定量调查的方法

定量调查的方法（共12篇）

1.定量调查的方法 篇一

摘要：关于中学物理教材内容的选取，虽已积累了丰富的经验，但尚缺乏定量分析研究。本文在大量调查，取得数据的基础上，探讨得出了一种选取高中物理教材内容的模糊定量化方法。

关键词：选取，必修课，教材内容，方法，模糊定量

分类号G633.7

1问题的提出

90年国家教委颁布了《现行普通高中教学计划的调整意见》。这次调整将高中物理分为必修课和选修课，尚属建国后的首次。必修课内容选取，结构安排，学时长短，教学要求深广度等方面还值得深入研究探讨。特别是必修课内容选取，既要照顾所有高中学生的物理学习，又必须考虑其内容与初中物理、高三选修课的过渡衔接。因此高中物理必修课教材内容的选取成为物理教育研究的一个热点问题。

2选取高中物理必修课内容的必要条件和主要因素

根据有关课程设计的基本理论和对学生存在不同要求的实际情况，选取必修课内容应主要考虑如下几方面：

1)学生个体学习后适应未来社会和个人生活的一般需要，应选取有利于提高学生科学文化素质的知识。

2)适应未来社会生产的大多数劳动者在基本技术上的需要，应选取实际上有广泛应用的`知识。

3)学生学完必修课后继续学习的需要，应选取在知识结构中处于重要地位的主干知识。上述三方面的知识都应满足一个前提条件：大多数学生在规定时间内接受的可能性。把上述确定必修课教材内容的三个方面和一个前提条件概括为三个因素和一个必要条件。即必要条件+一般需要因素应用因素逻辑因素

2.定量调查的方法 篇二

【关键词】空中交通；管制；定量安全风险

1.前言

随着我国国防力量的提升以及经济的可持续发展，我国的航空航天事业得到前所未有的发展，对空域的需求量不断的增加，空域结构日益复杂，空中交通管制逐渐向多样化、复杂化方向发展，空中交通运行的过程中安全风险不断的增加，给空中交通管制增加了很大的难度。

2.空中交通管制中安全风险的来源分析

笔者基于多年的空中交通管制经验，针对导致空中交通管制出现安全风险的各种原因进行了分析，具体包括以下几个方面：其一，环境因素，由于空中交通的环境复杂，包括内部环境、自然环境以及空域环境等，随着空中交通流量的增加，增加了空中交通管理的難度，如果在空中交通运行过程中缺乏沟通和管理，会导致出现飞行高度层出错、飞行偏离航线、航空器冲突等问题，再加上自然环境因素的不可预测性和不可控性，一旦出现天气突变的问题，势必会影响空中交通运行的安全性和稳定性；其二，设备因素，由于航空器或者飞机的运行环境非常复杂，在各种因素的影响下导致设备出现各种问题，管制人员失去对设备的有效控制，给空中交通运输埋下许多安全隐患；其三，人员因素，随着空中交通流量的增大，空管人员的工作量和工作强度不断增大，连续工作会导致空管人员在工作的过程中出现疲乏、困顿、反应迟钝等问题，在管制过程中出现错误、遗漏等问题，给空中交通管制带来许多安全风险，影响空中交通管制的安全性和稳定性。

3.空中交通管制定量安全风险调查技术

3.1空中交通管制定量安全风险调查技术。安全风险调查的基础是系统描述，以此识别空中交通管制过程中存在的各种风险，并通过风险分析获得结果，为解决安全风险或者隐患提供可靠的依据。文章创建了基于蒙特卡洛方法的定量风险调查技术，蒙特卡洛方法也称之为随机模拟法或者统计实验法，通过借助计算机进行大量的随机试验，以此研究随机变量的数值，被广泛的应用在解决工程技术、物理、生产以及管理等方面的问题中，蒙特卡洛方法的步骤表现为：

步骤1：利用计算机大量产生服从概率分布的随机数x，然后计算f（s），因为随机数性质，所生成的x的值都不是确定的，为了进行区分，可以对生成的x进行下标，采用xi表示第i个产生的x，通过统计生成x的个数来计算f（x）的值。步骤2：累加f（x），然后计算平均值，假设总共生成了n个x，则用数学公式表示为：

步骤3：设置停止条件，当到达停止条件之后自动退出，目前最常用的停止条件包括两个，一个为检测真实结果与计算结果的误差，如果误差在该范围内，则退出，如果超过该范围则继续；另一个为提前设定x的个数n，当数量足够之后自动退出。

3.2仿真分析。文章以航空器冲突风险为例，所谓航空器冲突是航空器在航行过程中出现航线冲突甚至是相撞的问题，为了便于仿真分析航空器冲突风险，应该定义一个冲突风险区，即航空器可能发生冲突风险的区域，如图1所示，当飞行航迹交叉之后，航迹发散角为0，不同防线航空器从不同方向汇集到相同航线后，很可能会发生冲突风险。采用蒙特卡洛方法对航空器冲突风险进行仿真分析，计算产生服从特定分布的随机数，以此对终端区航线运行过程中航空器发生冲突风险因素导致的航迹偏移的误差进行模拟，同时以实际飞行航迹进行验证，对航空器之间的实际距离进行实时的采集，将间隔距离控制在标准距离以上，通过计算两者之间小于标准距离的时间来分析航空器发生冲突的概率，具体步骤表现为：

步骤1：设定相应的仿真次数，循环次数用i表示，初值为0。步骤2：确定航空器的飞行航迹位置坐标。步骤3：通过利用不确定因素导致的误差，在模型中生产航空器生成分布的服从模型，并形成相应的航空器冲突对。步骤4：将实践作为判断以及验证航空器发生冲突的条件，以此判断在给定的时间间隔内两架航空器是否会发生冲突，如果在给定时间间隔下发生了冲突，则记录1次冲突事件。步骤5：判断和验证循环次数i，如果循环次数i小于SIZE，则继续进行循环计算，如果循环次数i大于SIZE，则退出循环。步骤6：当退出循环之后，最后输出航空器发生冲突的次数以及概率值。

3.3结论。空中交通安全风险发生的可能性不确定，给空中管制安全风险调查分析增加了难度，基于蒙特卡洛方法的定量风险调查技术，能够对航空器发生安全风险的次数、概率值进行精确的计算，为安全风险调查分析提供了可靠的参考。

4.结束语

综上所述，随着我国空中交通行业的快速发展，空中交通流量不断的增加，空中交通管制过程中的安全风险不断的增加，空中交通管制的目的在于提高空中交通秩序，避免航空器出现安全事故，基于蒙特卡洛方法的定量风险调查技术，能够对航空器运行过程中的安全风险进行定量分析，为空中交通管制安全风险的定量调查调查分析提供了可靠的参考，并且通过实践仿真分析，验证了基于蒙特卡洛方法的定量风险调查技术的可行性与可靠性，因此，值得将其广泛的推广和应用在空中交通定量安全风险调查分析中。

参考文献

3.定量调查的方法 篇三

光合细菌荧光定量PCR计数方法与其他测定方法的比较

光合细菌具有复杂多样的`代谢功能、丰富的营养及生理活性物质,而使其在农业应用中显示了越来越巨大的潜力,前景十分广阔.目前,以光合细菌为菌种生产的微生物肥料企业已有几十家,产品在水稻、蔬菜、果树和烟草等作物上都取得了较好效果.

作 者：关大伟 李俊 沈德龙 曹凤明 杨小红 作者单位：农业部微生物肥料与食用菌菌种质量监督检验测试中心,北京,100081刊 名：农业质量标准英文刊名：AGRICULTURAL QUALITY & STANDARDS年，卷(期)：2009“”(1)分类号：Q94关键词：

4.第三节 定量决策方法教案 篇四

【教学目标】

通过本节的学习，使大家了解风险型决策和不确定型决策问题及其多种求解方法，掌握风险型决策方法和不确定型决策方法，以期对大家的工作、科研、学习和生活提供帮助。

【教学重难点】 1.决策树法 2.不确定型决策方法 【教学过程】

决策是管理工作的本质，决策方法有定量决策方法和定性决策方法两大类。定量决策法是指根据现有数据，运用数学模型进行决策的一种方法。它能使决策精确化和程序化。

一、风险型决策

风险型决策:可供选择的方案存在着两种以上的自然状态，每种状态的发生是不确定的，但是可以估计其发生的客观概率，决策的结果只有按概率来确定，决策存在着风险。

例：某公司要进行产品产量决策，有三种备选方案。大批量生产、中批量生产和小批量生产。估计未来市场对该产品的需求有两种状态：需求量大和需求量小，每一种状态发生的概率分别为0.３和0.７。不同方案在不同状态下的损益值/万元，如表3-1所示，公司应如何决策？

表3-1不同方案在不同状态下的损益值（单位：万元）

大批量生产 中批量生产 小批量生产

需求量大（0.3）20 10

需求量小（0.7）

-6-2 5 风险型决策最常用的方法有两种：决策收益表法和决策树法

这两种方法都是根据各种自然状态出现的概率及方案预期损益，计算与比较各方案的期望值，从而选择满意方案的方法。不同：一个是决策收益表，一个是树状图。

决策准则：期望值最大或最小的方案为满意方案。

期望值=状态1的损益值x状态1的概率+ 状态2的损益值x状态2的概率+………+状态n的损益值x状态n的概率。

状态1的概率+状态2的概率+ …状态n的概率=1 1.决策收益表法

通过决策收益表,按照客观概率的大小，计算出各个方案的期望值，进行比较，从中选择一个满意方案，如表3-2所示。

表3-2决策收益表（单位：万元）

大批量生产 中批量生产 小批量生产

需求量大（0.3）需求量小（0.7）20 10

-6-2 5

期望值 4.8 4.6 6.5

☆ 满意方案为小批量生产

2.决策树法

决策树法的涵义：指借助树状图，按照客观概率的大小，计算出各个方案的期望值，进行比较，从中选择一个满意方案。

决策树的要素:决策点、方案分枝、状态点、概率分枝、结果点、剪枝

决策点引出方案分枝，编号 状态点引出概率分枝，上方注明概率 末端结果点，标明损益值

剪枝，即淘汰的方案

决策树分析法的基本步骤 ：

(1)从左向右逐级展开各方案分枝，状态结点和概率分枝。

(2)据右端的损益值及概率枝上的概率，由右向左，逆向进行，计算各种状态下的期望值，标在状态点上方。

(3)根据不同方案的期望值大小进行选择，方案的舍弃称为剪枝，剩下一条满意方案枝作为行动方案。

决策树如下：

大(0.3)4.81小(0.7)大批0中批小批4.626.53小(0.7)大(0.3)小(0.7)

二、不确定型决策方法

30-620-2105大(0.3)

不确定型决策：是指每个方案的执行都可能出现不同的结果，但是各种结果出现的概率是未知的，完全凭决策者的经验、感觉和估计作出的决策。

还是上面的例题，如果概率未知，如表3-3所示：

表3-3不同方案在不同状态下的损益值（单位：万元）

大批量生产 中批量生产 小批量生产

1.悲观法(小中取大法)

需求量大 30 20 10

需求量小-6-2 5 决策者认为未来会出现最不利的状态。从最不利的情况中选择最好的结果。☆ 满意方案为小批量生产 2.乐观法(大中取大法)决策者认为未来会出现最有利的状态。从最有利的状态中选择最好的。☆ 满意方案为大批量生产 3.后悔值法（最大最小后悔值法）

决策者做出决策后，若与理想状况有差距，必然后悔。

后悔值＝理想值－现实值 理想值：各自然状态下的最大收益值。☆ 满意方案为中批量生产

【作业】

某地可以种植四种作物，已知这四种作物在五种天气类型状态下，带来的收益如表所示，单位千元/ hm，不同天气类型出现的概率未知，请对种植方案作出决策。

不同天气状态下各方案的收益值（单位：千元/hm2）

天气类型（状态）

各方案的收益水稻 小麦 大豆

极旱年 10 25 12 11.8

旱年 12.6 21 17 13

平年 18 17 23 17

湿润年 20 12 17 19

5.定量调查的方法 篇五

一种基于荧光强度分析的高通量定量检测细胞凋亡方法

根据正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞的细胞膜对核酸荧光染料的不同选择通透性,用4μmol/L YO-PRO-1(YP)和4μg/ml碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色96孔板中的.细胞样品.分别在485/538(Ex/Em,nm)和530/590(Ex/Em,nm)的检测波长下借助荧光分光光度计检测细胞样品孔的YP和PI荧光强度.将YP和PI荧光强度值与用荧光显微镜对同一细胞样品细胞凋亡和坏死的定量分析结果相对应,通过对YP荧光强度值与凋亡细胞数的直线回归分析(r=0.999,P＜0.01),得到依据YP荧光强度值求得凋亡细胞数的直线相关方程.该方法可检测出样品中少至180个的凋亡细胞,具有灵敏度高和快速高效的特点.

作 者：叶玲玲 刘红 刘兴茂 李世崇 吴本传 王启伟 陈昭烈 YE Ling-ling LIU Hong LIU Xing-mao LI Shi-chong WU Ben-chuan WANG Qi-wei CHEN Zhao-lie  作者单位：军事医学科学院生物工程研究所细胞工程室,北京,100071 刊 名：中国生物工程杂志  ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 26(6) 分类号：Q819 关键词：荧光强度   高通量   定量检测   细胞凋亡  

6.定量调查的方法 篇六

关键词：能效逻辑；数据中心；PUE；DCiE

中图分类号：TP308文献标识码：A文章编号：1007-9599 (2011) 05-0000-01

Green Data Center Quantitative Evaluation Method Exploration Based on Energy Efficiency Logic

Miu Chenqi

(Shanghai Data Solution Co.,Ltd.，Shanghai201203,China)

Abstract:The construction of green data center core of the most important goal is to reduce energy consumption.This paper presents a based on energy-efficient logic green data center quantitative assessment methods.First to describe the logical process of using energy efficiency;then proposed how to achieve the quantitative assessment of the two indicators.

Keywords:Energy efficiency logic;Data center;PUE;DCiE

一、数据中心“绿色”发展必然要求

大量的数据证明，数据中心的基础建设绝对不能头痛就先医头、脚痛就先医脚，企业的计算需要有“绿色”的思维，与其日后的回头补课，还不如从现在就开始来拥抱绿色。

20世纪五十年代的时候，绿色运动就已经在西方很多国家兴起了，“绿色”思想逐步在全世界的范围内开始被人们所接受。“绿色”思想出发点就是为了保护我们有限的自然资源，调整人类不良行为，满足自然生态中的良性循环，保证人类在世界上的生存安全。在“绿色”思想推动与影响下，生态世界观也开始变成了人与自然界和谐相处的基本行为准则。

目前，我国数据中心的消耗电力只不过是全部的用电量冰山一角而已，在绿色数据计算上，政府机构、企事业单位和IT行业的供应商都必须避免一叶障目，不见森林。数据中心的能耗数据统计，只占全部能耗的5-6%。中原雅哉认为，就算是把绿色计算数据中心做到极致，也仍然是螺蛳壳里做道场。本着做一家具有责任感的信息数据技术公司的理念，应该将目光看得更远些、事情做得更多些。本人认为在绿色数据中心的计算进程中，IT行业的供应商具有巨大责任使命，只有在心中拥有了大绿色的数据中心计算宏伟蓝图，才能够做的出更好更完美的绿色解决方案和绿色技术，从而来为整个绿色环境事业做出重大的贡献[2]。

二、能效逻辑：节能新路标

最近几年来，数据中心需要怎么样有效的节能，一直是世界各国相关的学术机构和环保部门热议及关注焦点，他们为之做出了坚持不懈的努力。2007年8月，美国环保署就向国会递交了份报告，罗列出由Lawrence Berkeley国家实验室提供的10种最佳节能方案。这些方案有：安装变速装置方案、使用高动力马达方案、采用液体制冷方案、使用高功率水冷系统方案、提高空气流动通道效率方案、提高服务器利用率方案、利用自然冷却方案、照明控制方案、适宜的环境条件方案和提高能量转换效率方案等。

上述这10种方案都是节能的好办法。不过只是列举出节能方案还是不能解决问题，目前相关的机构缺少的是对数据中心节能这些方案进行客观中立的评估，这就使得数据中心的管理人员，无法完全的确定下来这些节能的方法是否有节能的功效，并且没有办法来针对数据中心的相关运营状况及设备情况来制定出一套绝佳的节能方案。

根据上述的情况，艾默生能源就是对信息数据中心能源的使用过程中所有的节能频率进行了量化，并且加以了评估及投资多长时间能得到回报做出定论，并提出了“能效逻辑”全新理念。这个能效逻辑新理念描述了信息数据中心内部级联节能效应，为IT部门的管理人员和信息数据中心提供了节能减排的新路标。

总的来说，绿色数据中心描绘了联合节能效应的模型（瀑布式模型），并指出，数据中心主要设备整体节能对数据中心效应的影响。服务器设备每节约4瓦特电，配电设备则能节约0.16瓦特电，交流电源节约1.24瓦特，直流电源节约0.72瓦特电，散热设备能节约4.28瓦特电，UPS能够节约0.56瓦特电，转换开关设备能节约0.28瓦特电。

三、数据中心定量显示的节能效果

能效逻辑也就是针对所设计的节能方案进行优先的排序之后定性出方法，它并不是定量的标准。实际上“定量是显示数据中心的能效，并且采取了节能方案之后能从数字上看出改进的效果”在相关业界并不普遍。07年第三季度艾默生网络能源对用户组进行调查，其中79%多的IT界权威人士认可了能源的效率提高对数据中心非常重要，可是仅有不到17%的接受采访的公司能拿出减少能源使用的计划书[1]。

艾默生网络能源的能源计划总监Jack Pouchet先生说：“我们的客户经常对我们说，效率是第一位的，但同时又是一个很难度量的概念。艾默生网络能源要做的就是用我们的能效逻辑方法帮助IT及数据中心的管理人员确定工作重心、找到量化起始点[1]。”

一个权威的量化起点就是“数据中心能效逻辑定量评价指标”—DCiE和PUE。DCiE是“Data Center Infrastructure Efficiency”的简称，代表的是数据中心基础设施效率；PUE是“Power Usage Effectiveness”的简称，代表的是能量使用效率。这两种概念都由绿色网格制定的。绿色网格是全球非盈利的组织，由业界权威专家构成，该机构致力于开发不受任何平台所约束的技术标准、处理流程、测量方法及新型技术，研制修订了数据中心能效定量评价的指标，包括艾默生公司。

艾默生网络能源提出的--能效逻辑，还有绿色网格组织制定的“数据中心能效定量评价指标”在不断的发展，为现今广大IT管理层的人员和数据中心提供了减少数据中心能量消耗的新思路，将为全球数据中心能源带来崭新的未来。

结语：在人们对绿色数据中心的概念，绿色数据中心在满足环境保护的同事，又把有限的资源有效利用，人类的人与自然协调以及健康舒适生活的、可持续发展等问题都有了相对系统的认识以后，什么样的数据中心才是绿色数据中心，应该满足哪些“绿色”的要求和标准，即如何建立有效测评绿色数据中心的标尺―绿色数据中心评价体系，是现如今必须要完成的一项工程。

参考文献：

[1]吴健.艾默生网络能源通讯[J].2008,4

[2]曹播.能效逻辑和数据中心定量评价指标[J].智能建筑与城市信息,2008

7.定量调查的方法 篇七

油田硫酸盐还原菌快速定量检测方法

摘要：现有油田废水中硫酸盐还原菌检测周期长、检测费用较高,本研究应用聚合酶链式反应(PCR)技术与倍比稀释法(MPN)相结合的DSR-MPN-PCR法,对硫酸盐还原菌进行快速定量检测.从废水中制备了直接用于PCR扩增的菌液,保证了定量准确性;建立以硫酸盐还原菌亚硫酸盐还原酶基因(Dsr)为靶位点的通用探针DSR1F和DSR5R的`反应体系和扩增条件.结果表明,该方法检测灵敏度明显比液体稀释培养法高2个数量级,真实地表征了废水中实际的SRB菌数量,整个操作过程需要3～4 h,检测结果非常稳定,降低了检测费用,可以在生产中应用.作 者：魏利    马放    王继华    赵立军    WEI Li    MA Fang    WANG Ji-hua    ZHAO Li-jun  作者单位：哈尔滨工业大学市政环境工程学院,哈尔滨,150090 期 刊：环境科学  ISTICPKU  Journal：CHINESE JOURNAL OF ENVIRONMENTAL SCIENCE 年，卷(期)：, 28(2) 分类号：X172 关键词：硫酸盐还原菌    菌液制备    定量检测    异化型亚硫酸盐还原酶    DSR-MPN-PCR法   

8.定量调查的方法 篇八

河流水污染物环境生物-地球化学过程定量分析的技术方法

摘要：本文运用水体中各类物质平衡原理,通过适当的测量和模拟,分别讨论了水生植物作用显著和不显著两种状态下,河流水污染物环境生物-地球化学过程定量分析的技术方法.分别给出定量分析总磷、有机物(CODcr 计)和氮素的沉积物释放、沉降再悬浮、水体生化降解、水生植物吸收吸附及氮素的.氨化硝化反硝化等环境生物-地球化学过程物质变化的绝对量和平均速率的技术方法.作 者：马严    吴锦芳    冯杰    严炎杰    吴惠英    MA Yan    WU Jin-fang    FENG Jie    YAN Yan-jie    WU Hui-ying  作者单位：浙江省湖州市环境保护监测中心站,浙江,313000 期 刊：三峡环境与生态   Journal：ENVIRONMENT AND ECOLOGY IN THE THREE GORGES 年，卷(期)：2010, 32(4) 分类号：X17 关键词：河流水污染物    环境生物-地球化学过程    定量分析   

9.定量调查的方法 篇九

关键词：聚乳酸（PLA）纤维/羊毛；混纺产品；溶解法；二氯甲烷；定量分析

中图分类号：TS101 文献标识码：A 文章编号：1674-7712 （2012） 18-0070-02

一、试验部分

（一）试验材料。聚乳酸纤维、羊毛、桑蚕丝、棉、粘胶纤维、腈纶、锦纶、涤纶、氨纶。（厂家提供）

（二）主要实验试剂。蒸馏水；1mol/L次氯酸钠溶液；75%（质量分数）硫酸溶液；80%（质量分数）硫酸溶液；88%（质量分数）甲酸溶液；65%～68%（质量分数）硝酸溶液；二氯甲烷。

（三）主要实验仪器。恒温水浴锅；真空泵；恒温烘箱Y802N，能保持烘干温度为（105±3）℃；分析天平，感量为0.1mg；干燥器，装有变色硅；具塞三角烧瓶，容量为250mL；玻璃砂芯坩埚，容量为30～50mL，微孔直径40～80nm；称量瓶；抽气滤瓶等。

（四）聚乳酸纤维回潮率测定方法。纤维放入恒温恒湿条件下平衡24h，恒重→称重→纤维经105℃烘干，恒重→称量。回潮率计算：回潮率=（湿重-干重）/干重×100%（1）

（五）聚乳酸纤维含量测试方法。试样→烘至恒重（105℃±3℃）→置于具塞锥形瓶中（加入所需试剂，控制条件）→过滤→用溶解试剂洗涤2～3次→水洗→吸干→温水洗→冷水洗→烘干→冷却→称重→计算。

从表1可以看出：1mol/L次氯酸钠溶液在30℃或100℃条件下均不能溶解聚乳酸纤维；75%（质量分数）硫酸溶液在50℃条件下不能溶解聚乳酸纤维，100℃条件下能完全溶解聚乳酸纤维；80%（质量分数）硫酸溶液在30℃条件下不能溶解聚乳酸纤维；88%（质量分数）甲酸溶液在30℃不能溶解聚乳酸纤维；65%～68%（质量分数）硝酸溶液在30℃条件下不能溶解聚乳酸纤维，65℃条件下将聚乳酸纤维完全溶解；二氯甲烷在25℃条件下能完全溶解聚乳酸纤维。

（二）聚乳酸纤维的回潮率。纤维的回潮率是纤维的重要性能指标，也是纤维定量分析中纤维含量分析计算的依据。通过对20个聚乳酸纤维试样回潮率测试，测得聚乳酸纤维在标准大气条件下的平均回潮率为0.4%。

（三）聚乳酸纤维和羊毛、桑蚕丝混纺的含量的测定。聚乳酸纤维/羊毛及聚乳酸纤维/桑蚕丝在1mol/L碱性次氯酸钠溶液中的溶解情况如表2所示。从表2可以看出，平行试样的结果绝对差值小于1%，表明用1mol/L碱性次氯酸钠溶液测定聚乳酸纤维/羊毛及聚乳酸纤维/桑蚕丝中各组分含量测试结果具有很好的准确性。

从表6可知，二个平行试样的结果绝对差值小于1%，表明用80%（質量分数）硫酸溶液测定聚乳酸纤维/氨纶中各组分含量测试结果具有很好的准确性。

三、结语

综上所述，采用二氯甲烷溶液对聚乳酸（PLA）纤维/羊毛混纺产品进行定量分析，试验数据有很好的准确性、重现性和稳定性，其样品之间误差小于试验允许误差1%。证明该方法具有试验条件合理、简单易行、操作方便、准确度和精度高等特点，符合实验室测试的要求，满足有关国家标准。因此，用二氯甲烷溶液测试聚乳酸（PLA）纤维/羊毛混纺产品进行定量分析方法是切实可行的。

参考文献：

[1]张满华，魏俊玲.聚乳酸纤维与棉混纺织物定量分析方法的探讨[J].针织工业，2011（03）.

10.定量调查的方法 篇十

应用绿色荧光蛋白基因标记细菌进行生物膜结构定量化新方法

绿色荧光蛋白基因pEGFP经CaCl2转化法标记E.coli JM109菌株,获得的.标记菌株作为模式细菌接种含50μg/mL氨苄的LB培养基,在摇瓶中与火山岩颗粒共混培养挂膜(37℃,120 r/min,16 h).用激光共聚焦扫描显微镜摄取获得火山岩填料生物膜250μm×250μm区域不同层面的图片堆,所获图片堆经COMSTAT程序处理可以获得相关的定量化参数,如16 h生物膜平均厚度为0.120 844 μm,生物膜最大厚度为10.5μm,生物膜体积为0.136 986μm3/μm2,生物膜表面积21 338.1μm2,生物膜比表面积为3.36 854μm2/μm3.该方法也可以扩展至其他绿色荧光蛋白基因标记细菌的生物膜结构定量化.

作 者： 作者单位： 刊 名：环境科学  ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ENVIRONMENTAL SCIENCE 年，卷(期)： 26(4) 分类号：X172 关键词：绿色荧光蛋白   大肠杆菌   生物膜  

11.律师尽职调查的方法 篇十一

中国律师在境内企业海外上市服务中进行尽职调查的方法主要包括：

1、会见境内公司代表，初步了解境内公司的具体情况通过会见境内公司代表，初步了解境内公司具体情况，为后续尽职调查打好基础。

2、向境内公司提供尽职调查《文件清单》和《问卷表》，索要文件和资料根据拟上市公司情况设计尽职调查《文件清单》和《问卷表》。《尽职调查文件清单》是律师列出的，要求境内公司必须提供的文件目录。《问卷表》是律师为进一步了解有关情况而设计的若干问题，由境内公司予以回答。《文件清单》和《问卷表》是律师在海外上市法律服务中履行尽职调查职责所普遍采用的一种基本方式。

3、查阅境内公司按《文件清单》和《问卷表》提供的证照、股东会决议、董事会决议、验资报告、重大合同、完税凭证、支付凭证和答卷等资料中国律师收到境内公司按《文件清单》和《问卷表》提供的证照、股东会决议、董事会决议、验资报告、重大合同、完税凭证、支付凭证和答卷等资料后，要进行分类和编号，然后仔细查阅，编制查阅清单，作为尽职调查报告的附件。

4、向政府登记机关查阅登记资料根据我国现行的公司工商登记管理制度的规定，公司成立时必须在工商行政管理部门进行注册登记，公司登记事项如发生变更，也必须在一定的期限内到登记部门进行变更登记。因此，可以到境内公司所在地工商登记机关进行查询，了解境内公司的成立日期、存续时间、公司性质、公司章程、公司的注册资本和股东、公司的法定代表人等情况以便判断境内公司是否合法成立、有效存续。

根据我国现行法律、法规的规定，不动产的转让或抵押也必须进行相应的登记。从房地产登记机构处，律师可以了解有关境内公司的土地房产权利、合同、各种物权担保和抵押、限制性保证和法定负担等情况。

向政府登记机关查阅登记资料是中国律师进行独立性调查的常用方法，其目的是核实境内公司提供的相关资料的合法性、准确性和完整性。但是，目前中国各地政府登记机关在公开登记资料方面做法各有差异，有的地方甚至禁止非诉讼相关律师查阅公司工商档案，这样，就给中国律师尽职调查造成很大的不便，律师只能请求境内公司要求政府登记机关向其公开登记资料，或仅仅根据境内公司提供的资料出具尽职调查报告，境外中介机构一般也可以接受。

5、向境内公司所属政府各职能部门核实情况当地政府（包括相关职能部门）是极为重要的信息来源，律师通过发函询证或直接从当地政府处可以了解境内公司目前是否享受的当

地政府所给与的各种优惠政策，特别是税收方面的优惠，境内公司在劳动人事、环境保护方面是否存在违规行为以及是否曾经受到行政处罚。通常，律师以及境外券商（保荐人）都会要求该等政府部门出具相应的证明文件，如完税证明、在劳动人事、环境保护方面未曾受到行政处罚的证明等，作为拟上市公司的重要基础性文件。

6、取得境内公司及其管理层出具的、表明其提供文件和资料内容属实且无重大遗漏的声明书。

中国律师要求境内公司及其管理层出具的、表明其提供文件和资料内容属实且无重大遗漏的声明书是防范自身风险的重要方式。因为中国律师依据经验要求境内公司提供的文件难免会有遗漏或不完整，但是境内公司及其管理层最了解境内公司的情况，要求其出具声明书，则可以敦促其提供遗漏的重大资料或承担未提供的责任。

律师尽职调查的目的和意义

尽职调查，译自英文“Due Diligence”，其原意是“适当的或应有的勤勉”。尽职调查是中国律师在境内企业海外上市服务中的一项重要工作，也是境外券商（保荐人）通常要求境内律师出具的法律文件之一。中国律师的尽职调查工作主要是对拟上市公司或拟上市公司在境内的权益（合称“境内公司”）所进行的调查和核查，并对调查及核查的结果进行分析后，做出相应的专业判断。

中国律师在境内企业海外上市服务中的尽职调查的目的和意义主要有：

首先，律师通过尽职调查，可以为海外上市方案及上市前重组并购的提供法律咨询意见，供拟上市公司和境外券商（保荐人）参考。

12.定量调查的方法 篇十二

摘 要：为了能够快速准确检测出市场中掺假牛肉制品，采用TaqMan探针法，建立一种用于快速有效检测牛肉制品中牛源性成分的荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）方法。选择GenBank中牛β-actin基因的保守序列，设计并合成特异性引物及TaqMan探针，以构建的pMD-18T-96-beef质粒为标准品，优化反应条件。结果表明：重组质粒标准品经PCR、测序和酶切鉴定正确，建立的标准曲线Ct值与模板拷贝数对数值之间呈良好的线性关系，相关系数为0.98，斜率为-3.345，敏感度为46.1 copies/?L。特异性实验表明，用该方法检测猪肉、羊肉、鸡肉、鸭肉、鹅肉等非牛肉制品结果均为阴性。批内重复实验变异系数均小于0.98%，批间重复实验变异系数均小于0.33%，表明该方法重复性良好。用建立的荧光定量PCR方法与SN/T 2051—2008《食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法 实时PCR法》同时对市场上40 份牛肉加工品进行检测，结果显示，本方法检测有3 份样品为牛源成分阴性，与SN/T 2051—2008方法检测结果相同。可见，本实验建立的荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速的特点，适用于检测市场中肉类掺假的行为。

关键词：肉制品；牛源性成分；荧光定量PCR；肉类掺假

Abstract： A real-time fluorescence-based polymerase chain reaction （PCR） assay that enables rapid and accurate identification of adulterated beef products was developed using TaqMan probe for the rapid and effective detection of bovine-derived materials in meat products. A pair of specific primers and TaqMan probe was designed according to the conserved sequence of the bovine β-actin gene. PCR reaction conditions were optimized using pMD-18T-96-beef plasmid as standard. The results showed that the pMD-18T-96-beef plasmid was confirmed to be valid by PCR， sequencing and enzyme digestion and the developed standard curve produced a good linear relationship between Ct value and initial amounts of total DNA with correlation coefficient and slope of 0.98 and ?3.345， respectively. The sensitivity was 46.1 copies/?L. No cross-reactions were found in specimens containing pork， mutton， chicken， duck and goose. The intra- and inter-assay variable coefficients were less than 0.98% and 0.33%， respectively， suggesting good repeatability. A total of 40 beef product samples from the market were measured by this method and the routine real-time PCR method from the industry standard SN/T 2051—2008. Of the 40 samples， 3 were detected as positive as consistently indicated by the two assays. This real-time PCR method with strong specificity and high sensitivity could provide a useful approach for the identification of meat adulteration.

Key words： meat products； bovine-derived ingredients； fluorescence-based quantitative polymerase chain reaction； meat adulteration

中图分类号：TS207.3 文献标志码：A文章编号：1001-8123（2015）09-0030-04

随着市场上牛肉价格的不断上涨，使其价格远高于其他种属肉制品，部分不法企业及商贩在高成本的牛肉中掺入低廉的其他肉类品种，冒充牛肉进行销售来谋取利益，这种行为在损害消费者利益的同时，也干扰了正常市场竞争秩序的建立[1-3]，造成恶劣的社会影响[4-6]。因此，建立一种快速、准确检测肉制品中牛肉含量的方法，具有非常重要的意义。对于肉源成分的检测，检疫部门通常采用以线粒体单拷贝基因为基础的荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）方法。自Tartaglia等[7]首先报道了PCR方法检测饲料中的牛、羊源性成分至今，大量研究报道了应用PCR及多重PCR技术对食品中不同肉类种属的鉴别方法[8-14]。实时荧光PCR技术具有特异性强、敏感性高、操作简便、快速高效等特点，将种属鉴定技术发展到了一个新的高度[15-18]，而探针法荧光定量PCR由于增加了探针结合反应，更进一步增加了该方法的特异性，在肉类掺假检测方面具有巨大的应用潜能。

与线粒体相比，一些管家基因的DNA为单拷贝基因，组织间差异不大[19]，有利于进行量化分析。因此，本研究选用牛β-actin基因组单拷贝基因种间保守片段，设计合成了一对特异性引物与TaqMan探针，构建牛源性成分标准质粒，绘制标准曲线，建立了检测肉制品中牛源性成分定量检测方法，为肉类掺假量化研究的进一步发展提供方法借鉴。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

生鲜牛肉、酱牛肉、肥牛卷、牛肉干、牛肉松、牛排、牛肉馅饺子、猪肉、羊肉、鸡肉、鸭肉、鹅肉均购自郑州市某超市。

组织裂解液、氯仿-异戊醇（24∶1，V/V）、3 mol/L

醋酸钠、TE缓冲液均为自配试剂；Tris平衡酚 北京

索莱宝生物科技有限公司；Premix Ex 2×Taq?（Probe qPCR）、pMD-18-T载体、工程菌DH5α感受态细胞 大连

宝生物公司；质粒小量制备试剂盒、琼脂糖凝胶快速回收DNA试剂盒 北京百泰生物技术有限公司。

1.2 仪器与设备

ABI 7500实时荧光定量PCR仪 美国应用生物系统（中国）公司；BioSpec-nano微量核酸蛋白仪 日本

岛津公司；Z36HK高速冷冻离心机 德国Hermle公司；NTS-4000AM恒温振荡水槽 日本Tokyo Rikakikai

公司。

1.3 方法

1.3.1 引物和TaqMan探针

查找Genebank中公布的牛肉单拷贝β-actin基因组的特异区域进行多序列的比对，针对其保守区域设计了牛肉的特异性引物bovine-F、bovine-R和探针bovine-P，并用FAM荧光染料基团标记探针的5端，非荧光淬灭基团BHQ1标记探针的3端，PCR扩增产物长度为96 bp。引物（上海）及探针均由生物工程（上海）技术有限公司合成。

1.3.2 样品DNA的提取

肉制品或生鲜样品，取100 mg充分研磨，置于1.5 mL EP管中，加入1 mL ddH2O，混匀后置-20 ℃反复冻融2 次，5 000 r/min离心3 min，取上清300 ?L用于酚-氯仿核酸提取，最后加入50 ?L 1×TE缓冲液溶解，作为PCR模板，贮存于-20 ℃备用。

1.3.3 标准质粒的构建

按照琼脂糖凝胶快速回收DNA试剂盒纯化PCR产物，并将其连接到pMD-18-T载体上，转入E.coli工程菌DH5α感受态细胞，并做酶切鉴定，由生物工程（上海）技术有限公司完成测序，并将其命名为pMD-18T-96-beef标准质粒。

1.3.4 牛源性成分荧光定量PCR检测方法反应条件的确定

在Premix Ex Taq?的基础上，选择20 μL的反应体系，对引物和探针浓度进行优化，以最小Ct值和最高荧光增量值为判定依据，从而确定引物和探针的最佳工作浓度。

1.3.5 牛源性成分荧光定量PCR标准曲线的绘制

利用核酸蛋白检测仪检测提取标准质粒的含量，取DNA纯度在1.8～2.0之间的质粒计算其浓度和起始拷贝数，起始模板量为3.32×106 copies/?L，10倍倍比稀释，共6 个梯度的标准质粒进行荧光定量PCR扩增，绘制荧光定量PCR标准曲线。

1.3.6 牛源性成分荧光定量PCR检测方法的评价

1.3.6.1 灵敏度

设置标准质粒梯度为3.32×106、4.76×105、3.50×104、3.47×103、5.13×102、4.16×101 copies/?L，荧光定量PCR能扩增的最低稀释度的拷贝数即为所建方法的灵敏度。

1.3.6.2 特异性

用建立的荧光定量PCR方法分别对猪肉、羊肉、鸡肉、鸭肉、鹅肉基因组进行荧光定量PCR扩增，评价该方法的特异性。

1.3.6.3 重复性

选取4.76×105、3.50×104、3.47×103 copies/?L稀释度的pMD-18T-96-beef标准质粒为模板进行荧光定量PCR扩增，分别做3 次组内重复和组间重复，评价该方法的重复性。

1.3.7 市售牛肉加工品的检测

为验证所建方法在实际样品检测过程中的准确性，购买市售牛肉加工品（酱牛肉、肥牛卷、牛肉干、牛肉松、牛排、牛肉馅饺子等）40 份，按照1.3.2节方法提取DNA模板进行检测。同时用SN/T 2051—2008方法对此40 份样品进行检测，比较2 种方法的符合率。

2 结果与分析

2.1 标准质粒的鉴定

由图1可知，对标准质粒进行PCR鉴定，可扩增到1 条约96 bp的片段，与连接前的PCR产物大小一致。由图2可知，标准质粒酶切鉴定正确，测序结果与目的基因序列相符，表明pMD-18T-96-beef标准质粒构建成功。

2.2 荧光定量PCR反应条件的确定

经过对引物和探针浓度的摸索，确定反应体系为：2×Premix Ex Taq?（Probe qPCR）12.5 μL，bovine-F、bovine-R终浓度为0.5 ?mol/L，bovine-P终浓度为0.025 ?mol/L，DNA模板2 μL，用双蒸水补齐至20 μL。实时荧光PCR反应条件为：95 ℃/10 s、95 ℃/ 5 s、60 ℃/ 20 s，40 个循环；35 ℃/10 s。结果判定，

Ct值<30为阳性，Ct值>40为阴性，两者之间为可疑，重复检验，结果一致且呈明显的对数增长，判定为阳性，否则为阴性。

2.3 牛源性成分荧光定量PCR标准曲线的建立

按优化的反应条件，取6 个稀释度的标准质粒pMD-18T-96-beef作为模板进行荧光定量PCR扩增，从而可以得出拷贝数对数值（x）与循环数（Ct）值之间的线性关系表达式：Ct=-3.345x+36.48，相关系数R2=0.98。

2.4 牛源性成分荧光定量PCR检测方法的评价

2.4.1 牛源性成分荧光定量PCR检测方法的灵敏度

标准质粒梯度为3.32×106、4.76×105、3.50×104、3.47×103、5.13×102、4.16×101 copies/?L时，用荧光定量PCR方法对不同质粒量的模板进行扩增，当标准质粒在4.16×101 copies/?L模板浓度时，仍然可以检测到牛源性成分阳性，故本检测方法的灵敏度为4.16×101 copies/?L。

2.4.2 牛源性成分荧光定量PCR检测方法的特异性

以不同肉种基因组为模板进行荧光定量PCR扩增，由图3可知，只有牛肉有荧光信号，猪肉、羊肉、鸡肉、鸭肉、鹅肉均无有效扩增，说明所建方法有很好的特异性。

2.4.3 牛源性成分荧光定量PCR检测方法的重复性

由表2可知，4.76×105、3.50×104、3.47×103 copies/?L

标准质粒稀释度3 次扩增的变异系数均小于0.98%，由批间重复性实验可知，3 个标准质粒稀释度的变异系数均小于0.33%。可见，本实验建立的荧光定量PCR检测方法具有较高的可重复性，从而保证了样品检测结果的可靠性和稳定性。

2.5 市售样品的荧光定量PCR检测结果

使用本研究建立的方法对40 份市售样品中的牛源性成分进行定量检测，结果显示，有2 份肥牛卷和1 份牛肉干存在检不到荧光信号的现象，表明市场上确实存在假冒牛肉成分的商品。而且该结果与SN/T 2051—2008方法的检测结果符合率达100%。说明本实验建立的荧光定量PCR方法可以用于肉制品中牛源性成分的检测。

3 讨 论

肉类鉴别涉及畜牧业的健康发展，消费者权益的保障，进出口贸易等诸多领域。对肉类鉴别方法的研究十分必要，特别是近几年的核酸扩增技术更给肉类鉴别提供了有利平台。肉类鉴别的靶基因主要包括3 类：线粒体基因组DNA、细胞基因组中重复序列和单拷贝序列。物种基因的正确选择及基因片段长度的大小是动物源性成分检测的关键，本研究选择单拷贝β-actin基因设计特异性引物和探针，是因为其组织间差异不大，在定量检测时更能准确的计算其拷贝数，对其含量进行量化分析。因此单拷贝基因DNA序列已广泛应用于研究物种的遗传分化，物种进化食品及饲料中动物源性成分检测的靶基因[20]。

本研究基于牛单拷贝基因组序列设计特异性引物和荧光探针，建立了肉制品中牛源性成分检测的TaqMan荧光定量PCR方法。经验证，本研究建立的方法特异性良好，检测灵敏度达到41.6 copies/?L。应用本方法对市售40 份牛肉加工品进行检测，发现确实存在牛肉成分肉类掺假的行为，而且该结果与SN/T 2051—2008方法结果符合率达100%。本研究可以满足日常的检测工作需要，是防止商家掺假牟利的有效手段之一。

荧光定量PCR方法对样品中的牛源性成分进行了相对定量，这方便了食品检测部门对样品中牛源性成分的无意沾染和故意添加做出判定。该方法修补了行业标准的漏洞，是对行业标准的有益补充。应用荧光定量PCR方法检测食品中的牛源性成分是我国行业标准发展的必然趋势，以指导我国食品检验检疫部门对食品的安全进行把关。

应用分子技术来检测食品安全是未来发展的重要方向，肉源成分检测历经了普通PCR方法、实时荧光PCR方法、以及定量PCR方法，虽然各方法还存在着一定的技术性问题，比如目前还不能通过对样品中不同肉源性成分的DNA拷贝数比来计算出其组分的质量比，但是随着分子生物学技术的不断发展必将会日趋完善，在生命科学技术领域有很大的应用前景。

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