葛根素生产厂家

葛根素生产厂家（共8篇）

1.葛根素生产厂家 篇一

谈生物素在动物生产中的应用

生物素是一种具有重要生理功能的水溶性维生物,文章简述了近年来生物素在动物生产中的应用及其缺乏引起的`猪裂蹄及其防治方法.

作 者：揣德强 作者单位：大庆东华油气开发股份有限公司,黑龙江,大庆,163713刊 名：中国新技术新产品英文刊名：CHINA NEW TECHNOLOGIES AND PRODUCTS年，卷(期)：2009“”(3)分类号：Q95关键词：生物素 猪裂蹄 防治

2.葛根素生产厂家 篇二

葛根的主要成分

葛根从根、藤、花到叶所含化学成分不尽相同。葛根中除含有优质淀粉、人体必需氨基酸 (赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸等) 和微量元素 (硒、锌、锰、锗等) 外, 还含有一定量的黄酮类物质, 主要活性成分为黄豆苷元、黄豆苷、葛根素、葛根素-7-木糖苷等物质。

葛根的功效

葛根性凉, 味甘辛, 具有发表解肌, 升阳透疹, 解热生津等功效。研究表明, 葛根异黄酮具有降低血压、减慢心率、扩张冠状血管、改善微循环、抑制动脉硬化、抗心律失常、改善脑循环等作用, 具有抗血小板聚集、降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗缺氧与抗氧化、收缩和舒张平滑肌、益智、解热、解酒与解毒等方面的功效。此外, 葛根异黄酮能显著抑制酪氨酸酶的催化活性, 中断黑色素氧化过程, 抑制黑色素的发生与形成, 从而防止黄褐斑、日晒斑等色素沉积。

从葛根中分离出的淀粉制成“葛根挂面”、“葛根果冻”、“葛根奶”等大众食品及保健食品如“葛根饼干”、“葛根口服液”、“葛根饮料”、“葛根冰淇淋”、“葛根保健酒”、“葛根红肠”等, 深受国内外用户欢迎。葛根异黄酮在国内外被广泛应用于各类新药中。葛根异黄酮具有抗氧化、增强机体免疫力的作用, 可作为功能性化妆品添加剂直接加入到各种基质的抗衰老及祛斑美白化妆品中。

制备方法

目前, 葛根异黄酮的提取多采用有机溶剂, 如乙醇、甲醇、正丁醇, 只有同时提取淀粉和异黄酮时才用水提法。醇回流法是葛根异黄酮提取最常用的方法, 即用一定浓度的醇溶液回流提取数次, 经过滤、浓缩, 获得葛根异黄酮浸膏, 该方法生产周期短、成本低、浸膏收得率高, 但异黄酮含量低;醇渗漉法用一定浓度的醇溶液对葛根进行渗漉, 渗漉液经浓缩即获得含葛根异黄酮的浸膏, 该法生产周期长、溶剂耗量大、浸膏收得率低, 异黄酮含量高。此外, 在醇提取法之前用纤维素酶等将葛根中的大分子物质降解, 有利于异黄酮的渗出。也可以用微波提取等方法制备粗葛根异黄酮。

1.大孔吸附树脂纯化葛根异黄酮

用乙醇提取葛根异黄酮, 再用吸附树脂进行提纯, 获得较高纯度及收得率的产品。该方法简单, 处理条件温和, 树脂可反复使用, 产品成本较低。

(1) 工艺流程

葛根粉→乙醇浸提液→浓缩液→脱水溶性杂质液→浓缩液—大——孔—树—脂—吸附—→乙醇洗脱液→浓缩液→真空干燥→成品

(2) 主要指标

产品为浅黄色粉末, 异黄酮收得率为1.9%~2.1%, 产品中葛根异黄酮含量为31.4%~34.2%。

(3) 检测方法

葛根异黄酮含量的测定:用紫外分光光度计法, 以葛根素为标准品, 在249 nm测量样品吸光值, 根据标准曲线计算出异黄酮含量。

2.大孔吸附树脂制备葛根素

用大孔吸附树脂制备葛根素的工艺, 该工艺以水为提取溶剂, 以大孔吸附树脂分离纯化葛根素, 再经过萃取及重结晶, 获得高纯度产品。

(1) 工艺流程

葛根粉→粗提液吸———附树—脂—柱→乙醇洗脱液→浓缩液→正丁醇萃取液→粗葛根素———重结—晶→高纯度产品

3.葛根异黄酮及葛根素综合制备 (1) 工艺流程

鲜葛根→清洗→干燥→破碎→乙醇回流→过滤→渣再提取→过滤→离心→滤液调p H→过滤→减压浓缩至干→异黄酮

(2) 主要步骤

(1) 葛根异黄酮提取:回流3次, 每次2 h;再用等量Ca (OH) 2乳提取1次, 减压浓缩控制。

(2) 葛根素提取:将从葛根提取的异黄酮, 通过树脂的色谱柱, 即可分离出葛根素。

联系人:金绍黑

单位:成都航空职业技术学院

成都金鹰翔生物技术研究所

地址:成都二环路南一段20号邮编:610021

3.柴葛根中葛根素提取工艺的研究 篇三

关键词：柴葛根 葛根素 提取

中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）24-0000-00

Abstract： The puerarin from Pueraria lobata ohwi was extracted by ethanol extraction， ultrasonic assisted extraction and microwave assisted extraction， The extraction rate of puerarin was the highest by ethanol extraction. According to the analysis of orthogonal experiments， the optimum extraction conditions of Puerarin were showed as follows： ethanol concentration of 80%， solid-liquid ratio of 1：6， extraction temperature of 32 ℃ and extraction time of 24 h， The extraction rate of puerarin in the above condition was 1.0287%.

Keywords： Pueraria lobata ohwi；Puerarin； extraction

葛根是豆科植物野葛、干葛藤的根经干燥后形成的， 其味甘、辛，性平，不仅可以入药，还是一种良好的营养保健品，属于卫生部公布的药食两用的资源[1]。葛根素是从葛根中提取出的主要有效成分，其含量作为葛根的质量评价指标之一。临床研究表明，葛根素具有改善心脑血管循环、降血脂、降血糖、抗氧化、提高免疫力等多种药理作用[2-3]，其药源丰富、安全范围广、疗效好而极具临床应用价值。

柴葛根是野生葛根的一种，其葛根素的含量较高。本文对柴葛根中葛根素的提取方法进行研究探讨，不但有益于综合开发利用葛根这一可再生资源，而且为探索一条简便、高效、经济的葛根提取方法提供理论依据，深化葛根在医药、食品领域的应用，具有重大的经济效益和社会效益。

1 材料和设备

1.1 材料

柴葛根（购自衡水同仁堂大药房），经胶体磨粉碎后备用，葛根素标品。

1.2 设备

胶体磨，紫外可见光分光光度计，恒温水浴锅，电子天平，超声波破碎仪，格兰仕微波炉，比色管，容量瓶等。

2 试验方法

2.1 标准曲线制作

精确称取10.0 mg干燥至恒重的葛根素标准品，置于50 mL容量瓶中，加少量95%乙醇溶解定容，可得0.2 mg/mL的葛根素标准溶液，冷藏备用。分别取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mL的0.2 mg/mL的葛根素标准液，置于9支10 mL的比色管中，以95%乙醇定容至刻度线，在波长250 nm处测定吸光值。以测得的吸光值为纵坐标，葛根素含量为横坐标，绘制标准曲线。

2.2 提取方法的确定

2.2.1 溶剂提取法

分别准确称取柴葛根各三份20 g，加100 mL95%乙醇常温分别提取24 h、48 h、72 h。确定葛根素得率。

2.2.2 微波辅助提取法

分别准确称取柴葛根各三份20 g，加100 mL95%乙醇微波200 W分别提取20 min、15 min、10 min后，再常温提取1 h。确定葛根素得率。

2.2.3 超声波辅助提取法[4]

分别准确称取柴葛根各三份20 g，加100 mL95%乙醇，常温置于超声波仪器中200 W分别提取40 min、60 min、80 min。确定葛根素得率。

2.3 柴葛根中葛根素的提取

2.3.1 单因素试验

以不同的乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间为单因素，考察各因素对葛根素得率的影响。

2.3.2 正交试验

以乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间为考察对象，采用4因素3水平正交试验，以葛根素得率为评价指标，确定柴葛根最佳提取工艺。

表1柴葛根正交试验因素及水平

水平因 素

A提取温度/℃B提取时间/hC乙醇浓度/%D 料液比

12820801：8

23024751：7

33228701：6

2.4 葛根素得率的计算

葛根素得率%=葛根素质量/葛根质量×100

3 结果与分析

3.1 葛根素含量标准曲线制作

图1葛根素标准曲线

从图1可知，葛根素含量的标准曲线为y=77.758x-0.0509，R2 =0.9988，葛根素含量与吸光值呈现良好的线性关系，能够准确定量。

3.2 葛根素提取方法的研究

用3种方法分别对葛根素得率进行测定，结果见表2。

表2 提取方法对柴葛根中葛根素得率影响

nlc202309021211

溶剂提取法超声辅助提取法微波辅助提取法

葛根素得率（%）0.79540.50990.5536

由表2可知，柴葛根中溶剂提取法对葛根素提取优于其它2种方法，其葛根素得率最高，达到0.7954%，超声波辅助提取法最低，仅为0.5099%，相当于溶剂提取法的64%，说明微波辅助提取法和超声波辅助提取法均不利于柴葛中葛根素的提取。所以柴葛根中葛根素的提取选择溶剂提取法。

3.3 单因素试验结果

3.3.1 乙醇浓度对葛根素得率的影响

准确称取柴葛根2.0 g分别溶于20 mL体积分数为95%、90%、85%、80%的乙醇中，在20℃下提取12 h，重复提取 3次，测定样品吸光度。考察乙醇浓度对葛根素得率的影响，结果见图2。

图2乙醇浓度对葛根素得率的影响

从图2可以看出，葛根素得率随乙醇浓度降低而增长葛根素得率随乙醇浓度降低而增长，在80%时最高，葛根素得率达到0.5652%。95%乙醇提取时葛根素得率最低，仅为0.4057%，相当于80%时的72%。结果表明，柴葛中葛根素提取的乙醇适宜浓度为80%。

3.3.2 料液比对葛根素得率的影响

准确称取2.0 g、2.2 g、2 g、1.8g四份柴葛根，分别溶于16 mL 、18 mL 、20 mL 、22 mL乙醇中，在20 ℃下提取12 h，重复提取 3次。测定样品吸光度，考察料液比对葛根素得率的影响，结果见图3。

图3料液比对葛根素得率影响

从图3可以看出，葛根素得率随料液比降低而增长，在1：8时最高，葛根素得率达到0.5349%。料液比为1：11时葛根素得率最低，仅为0.3144%，相当于1：8时的59%。结果表明，柴葛中葛根素提取适宜料液比为1：8。

3.3.3 提取温度对葛根素得率的影响

准确称取柴葛根2.0g溶于最佳量乙醇中，分别在20℃、25℃、30℃、35℃下提取12h，重复提取 3次，测定样品的吸光度，考察温度对葛根素得率影响，结果见图4。

图4提取温度对葛根素得率影响

从图4可以看出，葛根素得率随温度升高而增长，在30 ℃时达到最高，葛根素得率达到0.5375%，以后又缓慢下降。20 ℃葛根素得率最低，仅为0.3915%，相当于25 ℃时的73%。结果表明，柴葛中葛根素提取适宜的温度为30 ℃。

3.3.4 提取时间对葛根素得率的影响

准确称取柴葛根2.0g溶于最佳量乙醇中，分别提取18h、22h、24h、28 h，重复提取 3次，测定样品吸光度，考察提取时间对葛根素得率的影响，结果见图5。

图5提取时间对葛根素得率影响

从图5可以看出，葛根素得率随提取次数升高而降低或升高，在提取24 h是含量达到最大，葛根素得率为0.7954%，以后又缓慢下降。提取18 h时葛根素得率最低，仅为0.3736%，相当于24 h时的47%。结果表明，柴葛中葛根素提取适宜的提取时间为24 h。

3.4 正交试验结果

表3 正交试验结果

序号A提取温度B提取时间C乙醇浓度D料液比葛根素得率/%

111110.9628

212220.7361

313330.8824

421230.9708

522310.8181

623120.8133

731320.7908

832131.0287

933210.757

K10.8600.9080.9350.846

K20.8670.8610.8210.780

K30.8590.8180.8300.961

R0.0080.0900.1140.181

表4正交试验方差分析结果

因素偏差平方和自由度F比F临界值显著性

提取温度0.00020.0004.460

提取时间0.01220.5584.460

乙醇浓度0.02421.1164.460

料液比0.05022.3264.460

误差0.098

根据表3和表4数据显示，料液比对葛根素得率影响最大，其次为乙醇浓度和提取时间，温度的影响最小。方差分析结果显示，在95%的置信区间内，四个因素的F比都小于F临界值，对葛根素得率影响不显著。其最佳发酵参数为8号组合，即温度32 ℃，提取时间24 h，乙醇浓度80%和料液比1：6，其葛根素得率达到1.0287%。由正交试验得到的理论最优条件未包含在正交表的9个试验中，为了进一步确认试验结果，按理论的最优条件即温度30 ℃，提取时间20 h，乙醇浓度80%和料液比1：6，其葛根素得率达到0.9564%。因此，溶剂提取葛根素的最佳工艺条件为：温度32 ℃，提取时间24 h，乙醇浓度80%和料液比1：6。

4 结语

通过乙醇提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法对柴葛根中葛根素得率的研究，确定乙醇提取法为最佳提取法。乙醇提取柴葛根的最佳工艺：乙醇浓度80%和料液比1：6，温度32 ℃，提取时间24 h。用乙醇提取柴葛根中葛根素，提取效率高、溶剂可回收再利用、节能、无污染环保等优点，适宜用于工业化生产。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中国药典（Ⅰ部）[M].北京：化学工业出版社，2005：233.

[2] 曹铭希.葛根素的提取及其药理活性的研究进展[J].中国医药指南，2012，10（10）：48-49.

[3] 郭宇洁，孟硕.葛根素和葛根黄酮的药代动力学研究概述[J].中国实验方剂学杂志，2009，15（6）：82.

[4] 贺云.超声水解法从葛根中提取纯化葛根素[J].天然产物研究与开发，2005，17（3）：328-330.

收稿日期：2014-12-19

项目资助：河北省科技支撑计划项目（编号13227119D）

作者简介：赵娟娟（1982—），女，衡水市桃城区人，硕士，讲师，主要从事食品分析。

4.葛根素注射液的临床不良反应分析 篇四

1 葛根素注射液不良反应的临床表现

1.1 药物热反应

葛根素注射液所致不良反应药物热所占比例最高。患者临床表现多为先感畏寒、寒战, 后感口咽干燥、皮肤燥热、面色潮红、无出汗, 无咽喉疼痛、鼻塞、流涕、咳嗽、咳痰等症状, 肺部听诊无异常, 血常规、尿常规、肝功能、肾功能等化验均正常。据载, 一患者使用葛根素注射液 (普乐林) 至第12天时继续按常规静脉输注葛根素注射液, 当输注完毕约4h后, 患者突发寒战、高热, 体温高达39.8℃, 立即肌肉注射复方氨基比林2ml, 约6h后, 体温恢复正常。次日仍继续使用葛根素注射液, 当输注完毕约3h后, 再次发生类似寒战、高热的症状。此期间病房其他输液患者均无类似情况, 该患者也无其他感染征象, 由此诊断为葛根素注射液所致的药物热。停用葛根素注射液而后改用其它扩血管药物输液, 则未再发生类似发热反应。

1.2 溶血反应

据报道有2例使用葛根素注射液发生了溶血性肾功能衰竭。一例出现手、脚掌心片状红斑, 伴有明显痒感, 后出现腰痛、腹胀、心慌、发热的症状, 体温38.9℃, 经相关检查后诊断为血管内溶血、急性肾功能衰竭。另一例为患者用药2d后出现严重黄疸, 其巩膜黄染, 被诊断为溶血性黄疸。停用葛根素注射液, 同时服用疏肝利胆、清热化湿退黄的中药后黄疸消失。

1.3 过敏性休克

有10例使用葛根素注射液出现过敏性休克的患者, 症状除皮肤丘疹、瘙痒外, 还出现口腔粘膜充血、肌肉酸痛继而出现寒战、心慌的症状, 高热39℃～40℃, 其中一位患者出现抽搐、血压下降、心率缓慢、心跳停止, 停用该药, 并给予肾上腺素、地塞米松等对症治疗, 患者逐渐好转。以上病例经对症抢救处理均逐渐恢复。

1.4一过性血红蛋白尿

据报道一男性患者使用葛根素注射液 (普乐林) 过程中出现头昏、腹部胀痛伴全身乏力, 小便呈淡酱油色, 查体见腹肌压痛、双肾区叩击痛, 诊断为血红蛋白尿。停用葛根素注射液, 观察32h, 患者自觉症状消失, 尿10项实验室检查结果正常。

1.5 对肝功能影响

一位患者因使用葛根素注射液致丙氨酸氨基转移酶 (AL T) 增高。入院后2d查肝功能 (AL T22 IU/L) 。8d后自觉肝区不适、厌食。复查肝功能 (AL T103 IU/L、乙型肝炎表面抗原 (HB-sAg) (-) ) , 进一步查甲型肝炎抗体、丙型肝炎抗体以及乙型肝炎5项均为阴性。停用葛根素注射液使用强力宁7d后查肝功能正常。

1.6 肾绞痛

一患者, 因治疗心肌缺血使用葛根素注射液 (普乐林) , 第8天滴入葛根素注射液时, 开始出现双肾区绞痛、面色萎黄、大汗淋漓的症状, 立即停药, 待1h后疼痛减轻。继续使用葛根素注射液2d后又出现双肾区绞痛, 停药后疼痛消失。查尿红细胞少许, B超未见异常。

1.7 急性喉头水肿

男性患者57a。入院后第2天给予葛根素注射液0.5g, 加入5%葡萄糖注射液中静脉滴注, 点滴约200ml, 患者先感到注射部位手臂发痒, 接着感到口周发麻, 口腔内粘膜肿胀, 言语不利, 呼吸困难, 立即停止输液。即刻静脉注射醋酸地塞米松 (氟美松) 5mg、非那根25mg, 并请皮肤科、耳鼻喉科会诊。认为是药物过敏, 考虑为Ⅰ度喉梗阻, 建议加用西替利嗪, 加大氟美松用量, 3d后恢复正常。

2 总结

综上所述, 葛根素注射液变态反应可能是由于其作为抗原与血浆大分子物质结合形成复合抗原并产生相应抗体有关, 间歇使用葛根素注射液时, 易诱导抗体的产生, 而当一次大量用药时, 抗原多于抗体, 产生中等分子免疫复合物引起一系列免疫损伤, 表现为畏寒、发热、全身不适等。这种反应可能与患者的机体因素有关, 患者在出现严重的溶血反应及休克之前, 均有不同程度的发热、皮肤瘙痒、恶心等表现。葛根素注射液引起的不良反应其潜伏其有长有短, 在使用时应时刻注意, 发现反应后应立即停药, 对症治疗。因此, 用药前应详细询问患者过敏史, 凡为过敏体质者禁用。

参考文献

[1]王婷, 方娟娟.葛根素致速发喉头水肿反应1例[J].中国药学杂志, 2000, 14 (1) :72.

[2]徐芳, 何可南.葛根素罕见的严重不良反应[J].中国中西医结合杂志, 2003, 23 (5) :362.

5.葛根素生产厂家 篇五

（北京航空航天大学医院，北京，100083）

【摘要】目的：观察高压氧联合葛根素治疗突发性耳聋的疗效。方法：将87例突发性耳聋患者随机分为治疗组和对照组。两组均采用常规内科综合治疗，治疗组同时加用高压氧和葛根素。观察并比较两组治疗后的临床效果。结果：治疗组总有效率为90.91％，对照组总有效率为74.42％，治疗组的疗效明显高于对照组（P<0.01）。结论：高压氧联合葛根素是治疗突发性耳聋的有效方法之一。

【关键词】突发性耳聋；高压氧；葛根素

【中图分类号】R764.43+7【文献标识码】B【文章编号】1007-8517(2009)02-0026-01

突发性耳聋是耳鼻咽喉科常见急症之一，近年来发病率有上升趋势。目前，病因尚未明确，一般认为是内耳微循环障碍及病毒感染所致，由于内耳为一终末动脉，无侧支的特殊解剖特点，一旦发生供血障碍即出现听力障碍，因此，治疗的目的旨在改善内耳微循环，扩张小血管，溶栓降低血黏稠度，增加细胞供氧量，促进听力恢复^[1]。我们应用高压氧联合葛根素治疗突发性耳聋取得了较好的疗效，现将结果报道如下。

1资料与方法

1.1临床资料选择2007年5月～2008年10月我院收治的突发性耳聋患者87例，诊断均符合中华医学会耳鼻喉科学会1996年制定的突发性耳聋诊断标准^[2]。并排除患有心、肾、肝系统疾病，造血系统疾病等；未经控制的高血压患者，妊娠期妇女，精神病和癫痫病史患者。随机分为治疗组和对照组两组。治疗组44例(69耳)，其中男18例，女26例；年龄14～69岁，平均(40.1±5.7)岁；病程4h～35d，平均（8.3±1.5）d。对照组43例(64耳)，其中男15例，女28例；年龄16～70岁，平均（41.9±3.6）岁；病程3h～41d，平均（8.6±1.3）d。两组患者的性别、年龄、病程、病情轻重等一般资料经统计学处理无显著性差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法对照组给予血管扩张剂右旋糖酐、皮质类固醇激素、B族维生素、能量合剂等单纯药物治疗。治疗组在此基础上，加用高压氧和葛根素治疗：高压氧采用宁波产NG260/800－3中型多功能高压氧舱，治疗压力为0.25Mpa，升压20min，稳压后戴面罩吸纯氧20min共3次，间隔吸空气5min，减压20min出舱；葛根素注射液0.4g加入0.9％氯化钠注射液500ml静脉滴注。均每日1次，10次为一疗程，共3个疗程。观察并对比两组治疗后的临床疗效。

1.3疗效评定^[2]痊愈：0.25～4kHz各频率听力恢复至正常，或达到健耳水平，或达此次患病前水平；显效：上述频率平均听力提高30dB以上；有效：上述频率平均听力提高15～30dB；无效：上述频率平均听力改善不足15dB。

1.4统计学处理使用SPSS12.0统计学软件包。计数资料采用χ2检验，P<0.05为有显著性差异。

2结果

两组临床疗效比较见表1。结果显示，治疗组总有效率为90.91％，对照组总有效率为74.42％，治疗组的疗效明显高于对照组（P<0.01）。

3讨论

突发性耳聋的病因是多种因素的组合，多数认为与病毒感染、血管疾病、内耳水肿、耳蜗膜破裂、过敏等有关。无论何种致病因素，内耳微循环障碍是突发性耳聋及其它各种感音性耳聋的一个共同的病理基础。耳螺旋器细胞中蛋白质和核糖核酸的合成作用较血管纹等部位高出几倍，耗氧量更大，超过大脑皮质和视网膜，故毛细胞对缺氧更敏感，易发生缺氧，缺氧能引起耳蜗电化学电位改变，造成脑干听觉诱发电位异常，耳蜗毛细血管和血管纹、椭圆囊斑、球囊斑和壶腹脊的毛细胞均发生明显的线粒体水肿变性和内质网扩张、变性^[3]。高压氧治疗时，由于在0.20MPa压力下吸纯氧可使动脉血氧分压由常压下吸空气的13kPa上升到230kPa，血浆中溶解氧由0.3mL/100mL提高到5.3mL/lOOmL，血氧有效弥散半径由30μm扩大为7O～lOOtμm，所以，高压氧能成倍地提高血氧张力和氧含量，从而提高血氧扩散量和有效扩散距离，使处于组织细胞水肿的情况下用常规治疗无法解决的细胞缺氧获得足够的氧供应，也能有效地使氧从毛细血管弥散到毛细胞的速度和量成倍的提高从而能迅速纠正内耳缺氧状态；而且高压氧能加强细胞核苷酸代谢活动及细胞色素氧化酶作用，促进高能磷酸键形成增多，增加线粒体和细胞器中酶合成功能，加速螺旋器细胞中蛋白质和核糖核酸合成功能恢复，细胞功能和活力增加，从而使受缺氧损害的螺旋器和听神经功能恢复；有利于改善内耳微循环，降低血细胞比容，血清、血浆及全血黏稠性，减少血液阻力，随着内耳血氧供应的改善，红细胞变应性增加，组织吞噬细胞功能加强，成纤维细胞及胶原纤维合成增加，促使微血管栓塞解除及侧支循环的形成，使内耳血循环得到改善；能够在改善内耳微循环的同时利于抗凝、扩血管，维生素及能量合剂等药物进入内耳损伤的组织中，促使组织细胞的代谢及功能恢复^[4,5]。葛根素是一种新型的纯中药制剂，系豆科植物野葛干燥根中的提取物，其主要成分为8－1吡南葡萄糖4，7－二羟基异黄酮苷，具有扩张血管，抑制血小板聚集和降低血液粘稠度及调脂作用。现代药理研究表明^[6]，葛根素有一定的β－受体阻滞特点和抗血栓素(TXA2)及提高前列环素(PGI2)的作用。研究表明^[7]，突发性耳聋患者体内的TXA2是迄今发现的最强的血小板聚集物和促血管收缩物质，PGI2则是最有效的抑制血小板聚集物质和促血管扩张物质，二者的代谢产物TXB2、6－K－PGF1α之间的动态平衡在体内形成一对分子调节机制，对血小板聚集、血管张力及血栓形成等起着重要的调节作用，是维持正常血管和血流通畅的重要因素。葛根素对突聋治疗的药理作用为：能够扩张脑血管，对抗血管痉挛，增加血流量，改善低氧时的内耳微循环；抑制内耳组织在低氧状态下脂质过氧化，减轻氧自由基对内耳组织尤其是毛细胞的直接损害，从而改善内耳毛细胞的功能，使听力得以提高；尚能抑制血小板聚集，降低血小板黏稠度，可有效改善突聋病人的内耳微循环^[8]。本次研究中，高压氧联合葛根素的疗效较对照组明显提高（P<0.01），表明二者的联合使用可以从多层次、多环节缓解患者的听力损伤，是治疗突发性耳聋的有效方法之一，值得在临床上进一步推广。

参考文献

[1]高素兰.突发性耳聋高压氧治疗效果分析[J].临床医药实践杂志，2007，16（8）：795.

[2]中华医学会耳鼻咽喉科学会，中华耳鼻咽喉科杂志编辑委员会.突发性聋诊断依据和疗效分级[J].中华耳鼻咽喉科杂志，1997，32(2)：72．

[3]陈国亮，陈爱平.高压氧治疗突发性耳聋147例临床疗效分析[J].实用中西医结合临床，2008，8（3）：42－43.

[4]张淑香.高压氧综合治疗突发性耳聋的疗效观察[J].临床和实验医学杂志，2007，6（6）：58－59.

[5]任毅.高压氧综合治疗突发性耳聋70例[J].青岛医药卫生，2008，40（2）：112－113.

[6]王树莲，吴元，朱克文，等.葛根素治疗肺心病急性加重期的疗效观察[J].中华心血管病杂志，1999，27(2)：149.

[7]朱洪海，董民声，董明敏，等.阿司匹林对突发性耳聋患者血浆TXB2、6-K－PGF1α的影响[J].河南医科大学学报，1997，32(1)：94－96.

[8]周华，赵剑锋，高雪岭.葛根素联合丹参注射液治疗突发性耳聋23例疗效观察[J].中国医药导报，2008，5（16）：84－85.

6.葛根素生产厂家 篇六

【關键词】葛根素针；冠心病；心绞痛治疗

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.07.556文章编号：1004-7484（2013）-07-3962-02

冠心病的传统治疗方法主要是抗凝扩管营养心肌及对症支持治疗，近期随着对本病的深入认识，冠心病的治疗在传统治疗的基础上已有新的突破。而传统的硝酸酯类在冠心病治疗中常有降低血压、头痛等副作用，特别是对低血压患者所禁用。而冠心病患者大多存在多年的吸烟饮酒史，冠脉血管存在不同程度的硬化.狭窄，以及长期的慢性缺氧使心肌供氧减少，使心内膜下组织中乳酸堆积，高碳酸血症和酸中毒抑制左心功能，多合并有不同程度的心力衰竭，心律失常，心率偏快等症状，葛根素存在扩张冠脉、减慢心率，稳定心肌膜等作用，为冠心病病死率和病残率提供了新的实证，新的标准已代替了传统的治疗.已成为冠心病心绞痛治疗中常用药物.本科2010年——2012年共收治冠心病心绞痛病人456例，其中265例在传统治疗的基础上根据心率.血压及患者体重加用葛根素针治疗，取得了良好的疗效，现总结如下：

1资料与方法

1.1一般资料456例冠心病心绞痛患者均符合内科学（第七版）诊断标准，随机分为治疗组和对照组.治疗组265例，男158例，女107例.年龄50-78（平均64岁）.主要病因为不稳定性心绞痛173例，稳定性型心绞痛81例，变异性心绞痛11例.对照组191例，男103例，女88例.年龄48-79（平均64.4）岁.主要病因为不稳定性心绞痛112例，稳定性型心绞痛61例，变异性心绞痛18例。2组无论性别.年龄.病种及心功能差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2治疗方法2组入院后均给予吸氧，抗凝扩管营养心肌，对症支持治疗。治疗组根据患者心率，血压体重，在传统治疗的基础上加葛根素针治疗。治疗10-14天后心绞痛症状明显缓解，心电图显示心肌缺血有效纠正。

1.3疗效判定以心绞痛症状明显缓解，心电图显示心肌缺血有效纠正为有效，心绞痛症状无缓解心电图显示心肌缺血无改善为无效（不包括冠状动脉严重狭窄患者）。

2结果

2.1疗效2组疗效，治疗组均明显优于对照组。

3讨论

近年来，随着临床研究的深入，采用葛根素针治疗冠心病心绞痛取得了明显进步。葛根素是从葛根中提炼出来的具有扩张冠状动脉和脑动脉的作用，可降低血压，能显著增加缺血组织的血液供应量，有B1受体阻断作用，可明显减慢心瘁，降低心肌氧耗量，能减轻心肌缺血，限制和缩小心肌梗塞范围，抗快速心律失常，能降低胆固醇和血黏度，抑制血小板聚集，改善微循环等作用。本组效果显示在传统治疗的基础上加用葛根素针其疗效达95.6%，明显优于对照组（P<0.05），并且该药物价格便宜，性能平稳，适用于各个年龄段，各个阶层的人群，便于患者及基层医院接受。

参考文献

[1]黄国胜，周圣明，黄鹿.葛根素治疗心绞痛疗效观察.实用全科医学，2005年第04期.

7.葛根素生产厂家 篇七

1 葛根素对心脏的作用

1.1 葛根素对心肌缺血的抗氧化作用

李军等[1]研究发现, 葛根素对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠具有抗氧化应激作用, 能够减轻心肌酶学的改变, 并能剂量依赖性的减少心肌细胞凋亡, 从而减少心肌梗死面积, 对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有显著的保护作用。巩红岩等[2]的研究也表明, 葛根素能够有效降低缺血再灌注损伤, 对心肌缺血再灌注损伤有明显的防治作用。此外, 李军等[3]的研究还发现高、中剂量葛根素能够通过提高细胞凋亡抑制基因Bcl-2、Caspase-3的表达及降低促凋亡基因Bax的表达调控心肌组织细胞的凋亡, 从而起到保护心肌组织的作用。

1.2 葛根素对心绞痛的作用

李军等[4]研究发现葛根素在治疗不稳定型心绞痛上有一定的疗效, 能够有效的缓解心绞痛。葛根素针治疗冠心病心绞痛的疗效明显, 能够有效的缓解患者的心绞痛。对此, 李爱霞[5]的研究也得出了相同的结论。

李厚臣[6]的研究发现:葛根素注射液联合西药对不稳定性心绞痛的治疗较单纯西药治疗效果显著, 且无毒性反应。

在不稳定型心绞痛治疗过程中联合应用左旋卡尼汀和葛根素, 可改善心脏供血, 减少心肌耗氧, 提高疗效, 且无明显不良反应, 安全有效[7,8]。

和光宇等[9]也认为, 葛根素葡萄糖注射液治疗冠心病效果显著, 具有无明显毒副反应, 不易在体内积蓄、可经多种途径排泄等特点, 是一种较理想的治疗冠心病心绞痛的药物。

1.3 葛根素对心肌梗塞的作用

张金[10]等研究发现葛根素联合参麦注射液治疗急性心肌梗死疗效较好, 能显著提高患者的心功能, 减少心绞痛发作。

1.4 葛根素对心脏的其他作用

刘诗英等[11]证实葛根素具有可以改善左心室收缩, 改善心脏收缩功能, 减轻心肌纤维化的作用。陈蓉等[12]的研究表明, 葛根素对异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌纤维化有一定预防及治疗作用。

周勤[13]研究发现, 应用葛根素治疗肺心病急性发作, 患者症状和血液流变学各指标改善显著, 安全可靠。

2 葛根素对脑的作用

2.1 葛根素对脑缺血的作用

封菲等[14]研究发现葛根素具有脑保护作用。其可能是通过抑制脑组织基质金属蛋白酶-9 (MMP-9) 表达来减轻血脑屏障破坏和脑水肿, 而发挥缺血再灌注损伤时的脑保护作用的。同时, 也有研究指出, 葛根素对缺血性脑损伤也可以发挥保护性作用, 其可能是通过EPOR-JAK2-STAT-5信号转导通路途径发挥脑缺血后抗神经元凋亡的保护性作用的[15]。

王明智等[16]也发现, 葛根素对大鼠脑缺血再灌注炎症损伤具有保护作用。

2.2 葛根素对脑梗塞的作用

李落彩等[17]为研究葛根素联合丁苯肽治疗脑梗塞的疗效, 将180例脑梗塞患者随机分为治疗组和对照组, 每组90例。对照组采用静脉滴注奥扎格雷钠、复方丹参注射液和胞二磷胆碱;治疗组在对照组治疗方案基础上, 增加葛根素注射液每次100m L缓慢静脉滴注, 丁苯肽0.2g, 3次/天口服, 14天为1个疗程。结果表明:葛根素和丁苯肽治疗脑梗塞取得显著效果, 不良反应少, 早期应用, 效果更佳。

此外, 郭春玉等[18]研究表明, 葛根素治疗急性脑梗死具有显著的临床疗效, 有利于急性脑梗死患者的治疗。在临床治疗急性脑梗死过程中, 在常规治疗的基础上, 加用葛根素注射剂可以提高疗效[19]。

2.3 葛根素对脑的其他作用

王嘉炜等[21]研究发现, 葛根素是一种治疗动脉瘤性蛛网膜下腔出血 (a SAH) 后脑血管痉挛 (CVS) 的有效药物。此外, 还有研究表明, 葛根素具有较强的抗酒精性脑损伤作用, 能够减少机体对酒精的吸收, 减轻酒精所致的脑组织损伤, 对急性乙醇中毒造成的脑组织损伤具有保护作用[20,21,22]。

3 葛根素对肝的保护作用

王旭林等[23]研究发现, 肝缺血再灌注损伤可引起肝、肾组织形态结构改变, 造成能量代谢障碍是导致肾损伤的主要病理生理基础之一, 葛根素可通过改善肾组织能量代谢而减轻肾组织的损伤。

铅中毒可引起大鼠肝损害, 葛根素对铅中毒大鼠肝损害有保护作用, 葛根素的保护作用表现为对剂量依赖性, 与葛根素剂量大小正相关[24]。

4 葛根素对骨的作用

葛根素可通过细胞内TGF-β1/Smad信号通路促进骨形成, 也可能通过雌激素受体介导促进成骨细胞增殖及骨形成, 当浓度在10-10mol/L至10-7mol/L浓度范围内时, 葛根素对成骨细胞促增殖作用最强[25,26]。

钱康琦等[27]进一步发现, 葛根素通过TGF-B1及Smad2/3信号转导途径促进成骨细胞增殖与分化, 对骨量保持具有正向意义, 能够增强成骨细胞分化的敏感性;葛根素亦可通过调控此信号通路影响成骨细胞的增殖和分化, 揭示成骨细胞增殖分化的分子机制, 为其促进骨质疏松的治疗提供了新的依据。此外, 葛根素还可通过降低成骨细胞中Caspase-3的表达, 而起到治疗糖尿病性骨质疏松症的作用[28]。

吴琳琳等[29]发现, 葛根素能够促进牙周膜干细胞向成骨细胞分化, 在适当的浓度作用下, 葛根素可有效地促进人牙周膜干细胞 (h PDLSCs) 向成骨细胞分化, 为其应用于口腔临床防治牙槽骨吸收提供了理论基础。

此外, 葛根素还可以提高实验动物体内的雌二醇水平和成骨细胞的增殖分化[30]。

5 葛根素对肺的作用

梁茂锦等[31]发现, 葛根素注射液对降低肺动脉高压有一定的疗效, 其机制可能和降低血浆内皮素浓度和血液粘滞度有关。

葛根素还能有效抑制重症急性胰腺炎 (SAP) 时增高的磷脂酶A2 (PLA2) 活性, 减轻肺组织损伤, 是一种很有效的治疗药物[32]。

6 葛根素对神经的作用

6.1 葛根素对神经的保护作用

韩江全等[33]明确葛根素能够通过激活Akt, 促进细胞成活、减少细胞凋亡而起到保护神经的作用。激活PI3K/Akt信号通路可能是葛根素减少神经细胞凋亡、起到神经保护作用的机制之一。

葛根素能明显增强6-羟多巴胺致帕金森病模型大鼠右侧黑质组织中环-磷酸腺苷 (c AMP) 反应元件结合蛋白 (CREB) 表达活性, 提示其增加帕金森病大鼠CREB蛋白的水平, 减轻应激反应损伤, 保护神经细胞, 进而缓解帕金森病情, 可能是其抗帕金森作用机制之一[34]。

尚振德等[35]发现, 苯甲酸雌二醇和葛根素对创伤性脑损伤细胞均有神经保护作用, 其作用机制可能与增加细胞凋亡抑制基因Bcl-2的蛋白表达、延缓细胞凋亡有关。侯永春等[36]研究发现, 葛根素可能通过上调慢性脑缺血大鼠海马CA1区神经生长因子表达水平, 发挥对脑缺血神经元的保护作用。

6.2 葛根素抑制神经细胞凋亡的作用

李长天等[37]研究发现, 葛根素可以抑制大鼠海马神经元细胞的凋亡, 而对大鼠体重改变无显著作用。

王文胜等[38]人也发现, 葛根素能抑制痴呆大鼠模型海马神经元凋亡, 可为葛根素治疗痴呆提供理论依据。葛根素抑制Aβ25-35诱导的大鼠海马组织促凋亡蛋白Bax的表达, 增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达, 且抑制凋亡相关酶caspase-3的表达, 这可能是葛根素抑制神经元凋亡的分子机制。阿尔茨海默病 (AD) 作为一种慢性进展性的老年相关性疾病, 最需要可长期应用的有效的纯天然药品治疗, 葛根素可能就是适合的药物之一。

6.3 葛根素的镇痛作用

罗敬华等[39]用神经病理性痛模型小鼠为研究对象, 发现:适当剂量的葛根素对神经病理性痛具有明显的镇痛作用。

此外, 还有研究表明, 葛根素对烧伤引起的急性痛模型大鼠具有明显的镇痛作用, 其镇痛机制主要是通过抑制大鼠DRG神经元细胞以及外周血单核细胞的ATP受体 (P2X3和P2X2/3) 的表达来实现的[40,41,42]。

6.4 葛根素促进神经细胞增殖的作用

杨谦等[43]研究表明, 葛根素能增加去卵巢大鼠SVZ区神经干细胞的增值, 机制可能是依靠其雌激素样作用促进脑源性神经营养因子形成。腹腔注射常规剂量的葛根素能促进去卵巢大鼠双侧SVZ区神经干细胞的增殖, 同时增加脑源性神经营养因子的表达, 小剂量的17β雌二醇同样等促进去卵巢大鼠双侧SVZ区神经干细胞的增殖和脑源性神经营养因子的表达, 且两组作用无显著性差异。

李志伟等[44]人的研究表明, 大鼠脑缺血前后应用葛根素处理均能改善其空间学习能力, 并促进其内源性神经干细胞增殖。

6.5 葛根素对神经功能的恢复作用

丁聪亚等[45]研究发现, 复方丹参注射液和葛根素之间有正性协同交互作用, 联合应用可以更好地促进脑梗死患者的神经功能恢复。

7 葛根素对细胞的作用

7.1 葛根素对癌细胞的作用

刁汇玲等[46]研究发现, 葛根素可有效促进肾癌GRC-1细胞的凋亡, 并可减轻GRC-1细胞对阿霉素的耐药性。

此外, 通过抑制MMP酶活性, 葛根素还可有效抑制人胶质瘤细胞U251的迁移侵袭[47]。同时, 还有研究表明, 葛根素还具有治疗肿瘤、抗肿瘤的作用[48,49,50]。

7.2 葛根素对其他细胞的作用

王瑞等[51]研究发现, 中药单体葛根素对60Co-7射线致小鼠睾丸支持细胞急性损伤有一定的保护作用。此外, 也有研究人员发现, 葛根素对氧化应激诱导的人血管内皮细胞 (HUVECs) 损伤也具有一定的保护作用[52]。

周莹等[53]研究表明黑火药烟雾可诱导支气管上皮细胞炎性细胞因子IL-6、IL-8 m RNA的表达增加, 葛根素可抑制黑火药烟雾刺激支气管上皮细胞炎性细胞因子IL-6、IL-8 m RNA的表达。

此外, 也有研究发现, 葛根素对体外培养的脉络膜血管内皮细胞、牛视网膜血管内皮细胞有明显的促进增殖作用, 其作用程度与葛根素的剂量有关[54,55]。

8 葛根素的其他作用

8.1 葛根素对治疗眩晕的作用

郑学农等[56]研究发现, 葛根素具有舒张血管平滑肌, 改善脑血流量, 降低血黏度, 增加微循环等作用, 且未见明显不良反应。

8.2 葛根素对胰腺的作用

徐灵源等[57]研究发现, 葛根总黄酮对链脲佐菌素致糖尿病小鼠胰腺损伤具有保护作用, 机制可能与改善血糖代谢和抗氧化应激有关。

金伟等[58]研究发现, 血栓前状态分子标志物异常变化可能是急性胰腺炎 (AP) 发生、发展的主要因素之一。葛根素具有改善胰腺微循环和调节血栓前状态分子标志物的作用, 对急性胰腺炎 (AP) 有良好的治疗作用;其作用机制可能是葛根素抑制血小板、降低血黏度、抗血栓形成、改善血液流变学和循环, 减轻胰腺组织缺血、缺氧, 并抑制溶酶体酶释放和中性粒细胞趋化作用。

8.3 葛根素对血液流变性的作用

龚志刚等[59]研究发现, 葛根素可显著改善运动大鼠血液流变性的功能, 使大鼠运动能力有明显提高, 作用机制可能在于:葛根素可以降低大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数和红细胞刚性指数的水平, 有效改善血液流变水平。因此, 葛根素对于运动疲劳的产生和恢复都有积极的作用。

于林等[60]还发现, 葛根素具有改善颈椎间盘退变的作用。

8.4 葛根素对重度子痫的作用

韩星等[61]研究发现, 葛根素注射液可有效改善重度子痫前期的临床症状, 并能明显缓解子痫前期患者的凝血功能障碍和血管内皮细胞功能异常, 同时, 治疗过程中未见明显的药物不良反应。

8.5 葛根素的抗炎作用

胡建军等[62]发现, 葛根素预处理可抑制NF-κB p65表达, 进而降低其下游炎症因子TNF-α及MIP-2的分泌, 发挥抗炎作用, 是一种安全有效的天然抗炎药物。

8.6 葛根素对突发性聋的作用

黄成林等[63]应用葛根素治疗突发性聋研究, 发现葛根素静脉滴注治疗突发性聋的效果良好, 有效率为86.27%, 痊愈率为49.02%, 取得了较好的效果, 未发现明显副作用。结果提示在常规用药的基础上加用葛根素注射液可提高突发性聋的疗效, 且无明显副作用。

张明智等[64]人以大鼠作为实验对象, 也得到类似结论:鼠神经生长因子联合葛根素治疗突发性聋疗效好, 安全可靠, 早期治疗效果更显著。

8.7 葛根素对脊髓缺血再灌注损伤的作用

徐静磊等[65]研究发现, 甲基泼尼松龙 (MP) 与葛根素联用对预防脊髓缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。联合应用低剂量甲基泼尼松龙 (MP) 和葛根素能达到与使用大剂量甲基泼尼松龙 (MP) 预防脊髓缺血再灌注损伤 (SCII) 相当的作用, 既可减少激素的使用量, 又可降低因大剂量使用甲基泼尼松龙 (MP) 而引发的并发症发生率。

8.8 葛根素对糖尿病的作用

宋晗等[66]研究发现, 葛根素能够减轻糖尿病大鼠视网膜结构的病理损害, 早期干预能够阻止糖尿病视网膜病变过程中色素上皮衍生因子 (PEDF) 表达的下降, 延缓糖尿病视网膜病变的发病进程。此外, 葛根素对糖尿病大鼠肾脏病变也有一定的保护作用, 其部分机制可能是通过上调降钙素基因相关肽 (CGRP) 含量而实现的[67]。

9 不良反应报道

除了葛根素的正面治疗作用, 葛根素还可能会产生一些不良反应, 许焱等[68]研究发现, 葛根素可导致急性肾衰竭, 其机制可能是多方面的, 但主要为急性肾小管坏死, 与此同时, 免疫复合物在肾脏沉积诱发炎症反应引起肾小球及肾间质损伤, 也可能同时使肾衰竭加重。

除此之外, 某些葛根素制剂在一些方面引起不良反应或致病的例子[69,70,71,72,73,74,75,76], 表明葛根素在医药学及临床应用中也有不少需要引起注意的地方, 作为药用时仍需谨慎。

1 0 展望

综上所述, 随着现代临床药理研究的发展, 葛根素的众多药理作用和临床疗效逐步得到证实, 尤其是在冠心病心绞痛等疾病的治疗方面更是取得了可喜的效果。但葛根素具体药理作用机制、新药理作用的发现和验证等还需要深入研究。同时, 葛根素制剂不良反应的报道也在提醒着我们, 今后还应加大葛根素药理作用研究, 不断改进葛根素制剂工艺, 研发合理剂型, 减少和避免不良反应, 使之更好地为人们服务。

摘要：葛根素是从豆科植物野葛或甘葛藤的块根中提取得到的一种黄酮苷, 是葛根的最主要有效成份之一。葛根素的药理作用十分广泛, 葛根素制剂已应用于治疗视网膜静脉阻塞、缺血性脑血管病、突发性耳聋、冠心病和糖尿病等疾病。本文就葛根素对心脏、脑、肝、骨、肺、神经、细胞繁殖、糖尿病及其它方面作用等药理作用研究的新进展进行了综述, 并指出了存在的不良反应, 提出了研究问题和发展方向。

8.葛根素生产厂家 篇八

1仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪 ( 美国安捷伦公司) ; FA2004N电子分析天平 ( 上海恒平科学仪器有限公司) ; TGL - 16M台式高速冷冻离心机 ( 长沙平凡仪器仪表有限公司) ; 冷冻干燥机 ( 美国Vir Tis) ; DF - 101S集热式恒温加热磁力搅拌器 ( 河南省予华仪器有限公司) ; JY92 - 2D超声波细胞粉碎机 ( 宁波新芝生物科技股份有限公司) ; WD - A药物稳定性检查仪 ( 天津药典标准仪器厂) ; 葛根素标准品 ( 中国食品药品鉴定研究院) ; 葛根素原料药 ( 陕西惠诚生物科技有限公司) ; 甲醇色谱纯 ( 天津市科密欧化学试剂有限公司) ; 甲醇 ( 天津市科密欧化学试剂有限公司) ; 无水乙醇 ( 天津市科密欧化学试剂有限公司) ; 甘露醇 ( 北京化学试剂公司) ; 单硬脂酸甘油酯 ( 天津市科密欧化学试剂有限公司) ; 泊洛沙姆 ( 南京威尔化工有限公司) ; 水为纯化水; 其余试剂均为分析纯。

2方法

2. 1葛根素固体脂质纳米粒的制备

称取葛根素10mg, 加入甲醇定容至10m L, 超声溶解, 得葛根素甲醇溶液; 称取单硬脂酸甘油酯150mg, 加入少量无水乙醇将单硬脂酸甘油酯超声溶解, 得单硬脂酸甘油酯溶液; 称取泊洛沙姆125mg, 加入蒸馏水溶解至25m L容量瓶, 超声溶解, 得0. 5% 泊洛沙姆溶液。上述三种溶液加热至78℃ , 将葛根素甲醇溶液与单硬脂酸甘油酯溶液混合得到油相, 再将水相泊洛沙姆溶液缓慢滴加至油相中并搅拌, 搅拌速度为900rpm, 搅拌时间为10min, 将初乳超声, 超声功率60% , 超声破碎10min, 冰水浴固化, 过0. 45μm水系滤膜, 即得。

2. 2葛根素体外分析方法的建立

2. 2. 1最大吸收波长的测定

称取葛根素对照品适量, 用30% 的乙醇溶解并稀释, 配成20μg /m L的溶液备用。以30% 的乙醇为空白溶液, 在200 ~ 400nm的波长范围内进行光谱扫描, 取空白固体脂质纳米粒溶液适量, 加入30% 的乙醇超声溶解并定容至10m L, 同法对空白固体脂质纳米粒的30 % 的乙醇溶液进行紫外扫描。

2. 2. 2色谱条件

色谱柱: C18 ( 250mm × 4. 6mm, 5μm) ; 流动相: 甲醇- 水= 40: 60; 流速: 1. 0 m L/min; 柱温: 室温; 检测波长: 250nm; 进样量: 10μL。

2. 2. 3专属性考察

分别取3 m L空白葛根素固体脂质纳米粒溶液、 对照品溶液和葛根素固体脂质纳米粒溶液置于10m L的容量瓶中, 用甲醇定容至刻度, 过0. 22μm滤膜, 按上述色谱条件分别进样10μL。

2. 2. 4标准曲线的制备

精密称取葛根素标准品适量, 用30% 的乙醇配置成5个不同浓度的一系列标准溶液。按上述确定的色谱条件, 分别取10μL进样, 以峰面积 ( A) 对葛根素的浓度 ( C) 进行线性回归。

2. 2. 5精密度试验

分别取三种浓度的葛根素标准溶液各5份, 一天内重复进样5次, 计算日内精密度; 将葛根素标准溶液放置4℃ 冰箱内, 并每天进样1次, 连续进样5d, 计算日间精密度。

2. 2. 6回收率试验

精密吸取不同体积葛根素储备液于容量瓶中, 配制成三种不同浓度的葛根素溶液, 记录色谱图和峰面积, 代入标准曲线计算葛根素浓度。以实际浓度与相应理论浓度之比, 计算方法回收率。

2. 2. 7定量限和检测限

在前述色谱条件下, 配制一系列已知低浓度葛根素标准品溶液, 用0. 22μm微孔滤膜过滤, 进样10μL, 并测定其信号。

2. 3葛根素基本理化性质研究

2. 3. 1溶解性质考察

将葛根素溶解在甲醇、无水乙醇、乙醚和30 % 的乙醇溶剂中, 观察各溶剂内葛根素的溶解情况。

2. 3. 2油水分配系数的测定

本实验用正辛醇法测定油水分配系数。精密量取适量的葛根素放入水中, 超声溶解, 采用以上色谱条件测定葛根素在水中的浓度, 记C0。将用水饱和过的正辛醇及上述溶液装入三角瓶中, 混匀。将此三角瓶放入37℃ 的恒温水浴中搅拌72 h, 取出后静置。按以上色谱条件测定平衡后的水相中的药物浓度, 记C。

P为油水分配系数; C0为水相中药物初始浓度; C为分配平衡后水相中药物浓度。

2. 3. 3葛根素光稳定性试验

精密称取葛根素原料药5 mg置于西林瓶中, 另配制浓度为20 μg /m L的葛根素甲醇溶液, 自然光下放置, 分别于0、3、4、6、8 h取样测定, 计算葛根素的百分含量。

2. 3. 4葛根素热稳定性试验

精密称取葛根素原料药5mg置于西林瓶中, 放置在35℃的烘箱中, 同时配制浓度为20μg /m L的葛根素甲醇溶液, 放置在35℃ 的恒温水浴中。分别于5、10、30、60、80、120min取样测定, 计算葛根素的百分含量。

2. 4制备工艺的单因素考察

分别对搅拌速度、制备温度、搅拌时间、超声时间四个中的一个为变量来做单因素试验。以包封率为评价指标, 依次进行下列四个单因素试验: 搅拌速度 ( 400、600、800rpm) 、制备温度 ( 70、72、75℃) 、搅拌时间 ( 5、10、15min) 、超声时间 ( 8、10、12min) 。考察各因素的不同水平对葛根素固体脂质纳米粒的包封率的影响。

2. 5正交试验优化工艺

选取影响较为显著的4个因素, 进行L9 ( 34) 正交试验优化工艺。

2. 6质量评价初步研究

2. 6. 1外观观察

室温条件下, 肉眼观察葛根素固体脂质纳米粒溶液的外观。

2. 6. 2葛根素固体脂质纳米粒的冻干粉末

以6 % 的甘露醇为冻干粉末保护剂, 放入冷冻干燥机中, 24h后取出立即压盖密封, 即得葛根素固体脂质纳米粒冻干粉。

2. 6. 3稳定性考察

按最优处方制备3批葛根素固体脂质纳米粒溶液, 葛根素固体脂质纳米粒溶液分别放置在4 ℃ 和室温下放置保存。于1、2、3个月观察外观, 并分别取样测定其包封率。

2. 6. 4包封率及载药量的测定

取0. 5m L葛根素固体脂质纳米粒溶液置于离心管上端, 10000rpm, 离心10min, 滤液用甲醇定容至10m L, 按“2. 2. 2“”项色谱条件下进样检测。另取葛根素固体脂质纳米粒溶液0. 5m L置于10m L容量瓶中, 用甲醇超声, 并定容至刻度, 离心, 按 “2. 2. 2”项色谱条件下进样检测, 按下列公式计算包封率及载药量。

公式中Wtotal为药物的加入总量, Wfree为葛根素固体脂质纳米粒溶液中游离的药物量, Wlipid为纳米粒的总重量。

3实验结果

3. 1葛根中葛根素的体外分析方法的建立

3. 1. 1最大吸收波长的测定

葛根素标准品溶液在250nm有最大吸收, 见图1, 相应浓度的空白葛根素固体脂质纳米粒溶液在此处无干扰, 见图2, 因此选择250nm用于检测葛根中葛根素含量的检测波长。

3. 1. 2专属性考察

空白葛根素固体脂质纳米粒溶液、对照品溶液和葛根素固体脂质纳米粒溶液, 色谱见图3。B、C中葛根素的保留时间分别为8. 754 min和8. 908 min。

3. 1. 3标准曲线的制备

分别对不同浓度的葛根素标准溶液进样, 绘制标准曲线见图4。得线性回归方程: A = 26. 263C + 11. 600 ( r = 0. 9996 ) , 结果表明葛根素在16 ~ 80μg / m L范围内线性关系良好。

3. 1. 4精密度试验

分别计算日内及日间精密度, 见表1。葛根素标准品溶液的精密度均小于3% , 符合方法学要求。

3. 1. 5回收率试验

回收率计算结果见表2。此分析方法回收率均小于3 % , 符合方法学要求。

3. 1. 6定量限和检测限的测定

当信号值/基线噪声值= 2 ~ 3对应的已知浓度, 就是检测限。当信号值/基线噪声值= 10对应的已知浓度, 就是定量限, 得到最低检测限浓度为5ng / m L, 最低定量限浓度为10ng / m L。

3.2 葛根素基本理化性质研究

3.2.1溶解性测定

葛根素在甲醇、30%的乙醇的溶解度依次减弱, 在乙醚和无水乙醇中的溶解度大体一样, 见表3。

3. 2. 2油水分配系数的测定

当计算出Log P大于零, 药物为脂溶性药物, 结果表明, 葛根素为亲脂性药, 见表4。

3. 2. 3葛根素光稳定试验

通过测定葛根素原料药及葛根素溶液的百分含量, 结果显示葛根素对光基本稳定, 见表5。

3. 2. 4葛根素热稳定性试验

通过测定葛根素原料药的百分含量, 结果显示葛根素对热基本稳定。见表6。

3. 3制备工艺的单因素考察

3. 3. 1搅拌速度对葛根素固体脂质纳米粒包封率的影响

其他因素保持不变, 不同搅拌速度所得包封, 见图5, 从图5可以看出搅拌速度为800rpm时药物的包封率较其他两组高。

3. 3. 2制备温度对葛根素固体脂质纳米粒包封率的影响

其他因素保持不变, 不同制备温度所得包封, 见图6, 从图6中可以看出制备温度为75℃ 时药物的包封率较其他两组高。

3. 3. 3加热时间对葛根素固体脂质纳米粒包封率的影响

其他因素保持不变, 不同加热时间所得包封, 见图7, 从图7中可以看出加热时间为10min时药物的包封率较其他两组高。

3. 3. 4超声时间对葛根素固体脂质纳米粒包封率的影响

其他因素保持不变, 不同超声时间所得包封, 见图8, 从图8中可以看出超声时间为10min时药物的包封率较其他两组高。

3. 4正交试验优化工艺

本实验在单因素考察的基础上, 以包封率为考察指标, 筛选出影响葛根素固体脂质纳米粒溶液包封率的四个因素: 转数 ( A) 、加热温度 ( B) 、加热时间 ( C) 、超声时间 ( D) 。每个因素选取3个水平, 因素水平见表7。以包封率为筛选指标, 用正交试验表L9 ( 34) 对工艺进行优化。正交试验设计及见表8。

由表中极差值R可以看出各因素影响的主次顺序为B > D > A > C, 说明加热温度、超声时间、搅拌速度、加热时间对药物包封率的影响依次减弱。由此可知各因素的最优化组合为A3B3C2D3。最佳工艺为: 转数900rpm, 加热温度78℃, 加热时间10min, 超声时间10min。

3. 5质量评价研究

3. 5. 1外观观察

室温下, 观察葛根素固体脂质纳米粒溶液的外观比较澄清透明, 并伴有蓝色乳光。

3. 5. 2葛根素固体脂质纳米粒溶液的冻干结果

以甘露醇为冻干粉末的葛根素固体脂质纳米粒, 外形饱满, 颗粒疏松, 表面光滑。

3. 5. 3稳定性观察结果

葛根素稳定性, 见表9。葛根素固体脂质纳米粒溶液在4℃ 保存下, 微粒较稳定; 在室温下保存, 微粒变化较大。

3. 5. 4包封率及载药量测定

按"2. 6. 4" 项下测定方法及计算公式得包封率及载药量, 测得的平均包封率为96. 43 % , 载药量为1. 47 , 见表10。

4讨论

本实验建立了体外分析方法, 确立了用高效液相色谱法进行葛根素固体脂质纳米粒的含量测定。 采用乳化- 超声分散法制备葛根素固体脂质纳米粒溶液, 从经济学的角度考虑, 乳化- 超声分散法操作简单, 可控性较强, 质量影响因素相对较少[5,6]。以包封率为评价指标, 采用L9 ( 34) 正交试验设计方法表明, 最终确定优化后的制备工艺为: 制备的时候搅拌速度为900rpm, 制备温度为78℃, 搅拌时间为10min, 超声时间为10min。将超声后的葛根素固体脂质纳米粒溶液过0. 45μm滤膜, 即可得有蓝色乳光的葛根素固体脂质纳米粒溶液。

参考文献

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[3]Mehnert W, Madex K.Solid lipid nanoparticles:Production characterization and app lications[J].Adv Drug Deliv Rev, 2001, 47 (2/3) :165-196

[4]陈玲, 周建平.固体脂质纳米粒研究新进展[J].药学进展, 2003, 27 (6) :354-358

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