术中快速冰冻切片技术工作制度

术中快速冰冻切片技术工作制度（精选4篇）

1.术中快速冰冻切片技术工作制度 篇一

冰冻切片快速病理诊断30年总结

秦皇岛市肿瘤医院病理科

康文喜 谢芳芳 王小聪 李英 邮编：066001

术中冰冻切片快速病理诊断是1818年由Pieter de Riemer首先创造发明的，1891年Halsted和Accarty将冰冻切片技术列为正式诊断方法。目前国内外已将此项技术普遍应用于临床，解决手术中的病理诊断问题。并日益受到外科医生和患者的欢迎和肯定。随着冰冻切片技术和临床外科手术的发展，要求做冰冻的病例逐年增多，截止到2012年10月份，本院病理科开展快速冰冻病理诊断30余年，共完成冰冻快速病理诊断1476例，积累了一定的经验和教训，为了更进一步提高冰冻快速病理诊断水平，提高冰冻诊断准确率，降低误诊率，作者将30年来所有冰冻切片快速病理诊断病例进行总结分析如下。1 材料和方法

1.1 一般资料

本组1476例大部分来自本院住院病人，小部分来自其他医院。其中男897例，女579例，年龄最大81岁，最小5个月。1.2 病变部位

乳腺1052例，软组织42例，胃33例，淋巴结33例，骨12例，腹膜9例，睾丸及附睾8例，甲状腺47例，小肠15例，大肠25例，膀胱5例，脊椎5例，阑尾10例，胆道14例，阴茎19例，卵巢53例，脑及脑膜3例，前列腺3例，肝12例，肾26例，脊髓2例，喉2例，子宫42例，精索1例，纵隔1例，腹膜后1例，眼1例。

1.3 方法

本组1476例均采用德国进口莱卡冰冻切片机切片，HE染色，普通光学显微镜观察。

1.4 结果

1476例中，恶性肿瘤687例，良性肿瘤388例，瘤样病变170例，炎症202例，结核29例，确诊1457例，未能确诊15例，误诊4例。2.讨

论

冰冻切片质量差，最初很多著名的病理学家如Ewing、Brewer、Simpson等曾经怀疑冰冻切片的准确性，1960年Cryostat冰冻切片机正式应用于临床后，冰冻切片质量有了很大提高，但和石蜡切片相比仍很逊色，对准确的冰冻病理诊断带来一定困难，尤其对年轻的病理科医生来说难度较大，缺乏经验的病理科医生难以胜任此项工作，下面根据自己个人的经验发表一点看法。

2.1 冰冻切片快速病理诊断的优缺点：冰冻切片快速病理诊断的优点是在手术过程中随时取材，迅速做出准确可靠的病理诊断，同时也减少了病人二次手术的痛苦。缺点是切片厚，细胞大，层次多，易造成错觉。另外冰冻切片诊断要求报告快，没有更多思考讨论余地，一旦报错，将造成严重的无法弥补的后果。

2.2 准确率：本文对1476例冰冻切片进行了统计分析，结果准确率为98.7%，未能确诊率为1.02%，误诊率为0.3%，与国内报道相比准确率相仿，而误诊率低于各家报道。

2.3 未能确诊和误诊的原因：⑴

取材不当：恰当准确的取材是正确诊断的必备条件，取材不当就不可能得出正确的病理诊断。当临床切取肿物困难时，所送检的肿物标本不一定是肿物中心组织，很可能是肿物边缘组织，这种组织大部分是肿物周围的正常成分，或仅带有少量肿物，此时应多切几个切面进行观察，在把握不足的情况下可多取几块组织做切片，以防漏诊。⑵

切片质量不佳：切片过厚，组织未能展平出现折叠，组织缺损，染色深浅不均等都直接影响诊断结果。因此，一张高质量的冰冻切片要求厚度不得超过10微米，而且要平整，无折叠无破损，染色深浅适中。

图1：乳腺冰冻切片

图2：同一病例常规石蜡切片

⑶

病理医师经验不足：医生经验不足是误诊的重要原因，从事冰冻快速病理诊断的医生，必须要经过相当长的时间训练和有足够的石蜡切片诊断经验方能胜任此项工作。2.4 冰冻切片快速病理诊断应注意的几个问题：⑴

甲状腺肿物冰冻切片

滤泡性甲状腺癌、胚胎型甲状腺瘤和 Hurhle 氏细胞腺瘤的良恶性鉴别诊断在常规石蜡切片上均有一定难度，在冰冻切片上若想准确的进行鉴别则更加困难，为了防止误诊，有些知名的老专家主张在基层单位的病理科不宜开展甲状腺肿物的冰冻切片快速病理诊断。我们认为，当冰冻切片较难做出良恶性判断时应等石蜡切片确诊，不要冒然发出良性或恶性的报告。另外在许多甲状腺疾病中常常出现一种多形性大细胞，易与恶性肿瘤细胞相混淆，在冰冻切片诊断时应特别注意。这种细胞与恶性肿瘤细胞不同之处是染色质分布均匀，胞浆丰富，不见核分裂像。⑵

淋巴结

术中送淋巴结做冰冻快速病理检查多用于确定有无癌转移，以便手术医生选择手术方式和手术范围。原发于淋巴结的恶性淋巴瘤一般不用冰冻切片方法进行诊断，因为正常未脱水的淋巴细胞膨胀，体积大，加之切片厚，很难与恶性淋巴瘤瘤细胞进行区别，在冰冻切片诊断淋巴结原发性恶性淋巴瘤时要格外慎重。⑶

骨：骨肿瘤冰冻切片快速病理诊断因涉及到截肢，病理科医生的责任十分重大，应慎之又慎。在诊断中一定要密切结合临床及X线，特别是镜下观察，必须结合大体标本的形态特点、取材部位认真分析作出判断。因骨肿瘤病理形态变化多端，送检组织块小常不能代表肿瘤病变全貌，给良恶性判断带来非常大的困难，在确实无法肯定良恶性时，应缝合切口，待石蜡切片确诊后再做处理。

2.术中快速冰冻切片技术工作制度 篇二

1 资料与方法

1.1 临床资料

本研究选择的对象为2008年8月至2014年6月于我院病理科的67例冰冻切片, 患者年龄18~78岁, 平均年龄47岁, 其中男43例, 女24例, 上述切片包括肿瘤以及非肿瘤病变。

1.2 方法

术中冷冻切片:所取标本为术中所取病变部位的活体标本, 将其迅速冷冻, 用切片机切片制片, 在固定液中固定半分钟时间, 将固定液洗去, 经过HE常规染色, 脱水固封即得。石蜡切片:将切片用固定液进行固定, HE常规染色即得。观察两种切片的诊断有效率。

1.3 判定标准

主要包括确诊、基本肯定诊断、未确诊滞留诊断及误诊。确诊:冰冻切片的诊断结果与石蜡切片结果基本一致;基本肯定诊断:冰冻切片肯定良恶性, 但分级或分类有差别;未确诊:冰冻切片没有给出明确的诊断;误诊:冰冻切片诊断出现错误。

1.4 统计学方法

数据处理软件包为SPSS13.0, 计量的比较采用t检验, 计数的比较采用χ2检验, P<0.05表示有显著性差异。

2 结果

2.1 67例冰冻切片组织分布部位

67例冰冻切片中甲状腺的例数最高为39例, 比例58.20%;其次为乳腺16例, 比例23.88%;生殖系统5例, 比例7.46%, 其他7例, 比例10.45%, 见表1。

2.2 67例冰冻切片病变性质的分布

各种病变性质中良性肿瘤的比例最高, 为32例, 比例47.76%;恶性肿瘤18例, 比例26.87%, 非肿瘤性病变16例, 比例23.88%;交界性肿瘤较少为1例, 比例1.49%, 见表2。

2.3 2346例术中冰冻切片的诊断情况

67例术中冰冻切片中确诊例55数例, 占比例82.09%;基本肯定诊断4例, 占比例5.97%;未确诊滞留诊断8例, 占比例11.94%。确诊的比例要显著性的高于基本肯定诊断及未确诊所占的比例, 三组比较有显著性差异 (P<0.05) , 见表3。

3 讨论

近年来, 随着对术中冰冻切片研究的不断深入, 术中冰冻切片已经逐渐被应用到病理诊断中[2,3,4], 术中冰冻切片对于病理的诊断具有十分重要的应用价值:快速确定病变的性质, 术中送检的样本从送检到结果知晓大约需要半个小时的时间, 时间较快, 医师可以根据切片结果确定手术的方案;术中冰冻切片可以避免进行再次手术, 能够预防手术中切除过多或者切除不完全的现象。

本研究通过对我院67例冰冻切片进行研究, 治疗结果显示确诊率82.09%, 基本肯定诊断率5.97%, 未确诊率11.94%, 结果与文献报道基本一致[5], 冰冻切片技术的局限性导致了冰冻切片与石蜡切片相比还是存在许多不相符的情况。未确诊的原因[6]:部分病例属于诊断相对困难为避免误诊选择延迟诊断, 部分属于不适合做冰冻切片诊断该做常规。冰冻切片误诊是个需要特别注意预防的问题, 本组病例误诊率为0, 可能与所选取病例数目有关。冰冻切片中误诊的一个重要原因就是病理科的医师可能在取组织的过程中由于观察的不够细致导致诊断的一个错误。这种冰冻切片的误诊会导致外科医师在手术方案选择上的错误, 导致手术的失败, 最终导致医疗事故的发生, 因此病理医师一定要在具备一定专业知识的基础上, 具有一颗负责任的态度去工作, 提高诊断的水平, 从而更好的服务于广大的患者。

综上所述, 术中冰冻切片虽然取得了一定的进展, 确诊率较高, 但仍未完全排除其中的未确诊甚至误诊情况的发生, 因此我们要加强对病理人员的技能培训, 责任心教育, 从而提高术中切片诊断的有效率, 避免误诊情况的出现, 更好的服务于临床病理科的诊断应用。

摘要：目的 通过术中冰冻切片与常规石蜡切片诊断准确率的比较分析, 探讨术中冰冻切片应用价值。方法 本研究选择的对象为2012年1月至2014年6月于我院病理科的67例术中冰冻切片, 所取标本为术中所取病变部位的活体标本, 将其迅速冷冻, 用切片机切片制片, 在固定液中固定, 将固定液洗去, 经HE染色, 脱水固封即得, 观察术中冰冻切片的确诊率。结果 67例冰冻切片中甲状腺的例数最高为39例, 比例58.20%;其次为乳腺16例, 比例23.88%;生殖系统5例, 比例7.46%;各种病变性质中良性肿瘤的比例最高, 为32例, 比例47.76%;恶性肿瘤18例, 比例26.87%, 非肿瘤性病变16例, 比例23.88%;交界性肿瘤较少为1例, 比例1.49%;67例术中冰冻切片中确诊例55数例, 占比例82.09%;基本肯定诊断4例, 占比例5.97%;未确诊滞留诊断8例, 占比例11.94%。确诊的比例要显著性的高于基本肯定诊断及未确诊所占的比例, 三组比较有显著性差异 (P<0.05) 。结论 综上所述, 术中冰冻切片虽然取得了一定的进展, 确诊率较高, 但仍未完全排除其中的未确诊情况的发生, 因此我们要加强对病理人员的技能培训, 责任心教育, 从而提高术中切片诊断的有效率。

关键词：术中,冰冻切片,常规石蜡切片

参考文献

[1]Wu L L, Cheuk W, Poon M, et al.Dye-containing histiocytes in frozen section of sentinel lymph node:a potential mimicker of carcinoma[J].Int Surg Pathol, 2009, 17 (3) :262.

[2]Sala P1, Morotti M, Menada MVet al.Intraoperative frozen section risk assessment accurately tailors the surgical staging in patients affected by early-stage endometrial cancer:the application of 2 different risk algorithms[J].Int J Gynecol Cancer, 2014, 24 (6) :1021-1026.

[3]万春生, 何婷玉.甲状腺肿物637例术中冰冻切片诊断分析[J].中国社区医师?医学主要专业, 2012, 14 (306) :204.

[4]Wu C, Qu X, Mao Y, et al.Utility of Intraoperative Frozen Section in the Diagnosis of Periprosthetic Joint Infection[J].PLoS One, 2014, 19 (7) :e102346.

[5]刘艳丽, 聂增尧, 回允中.术中冷冻切片594例病理诊断分析[J].诊断病理学杂志, 2010, 17 (5) :382.

3.手术中冰冻切片病理检查志愿书 篇三

门诊、住院科 室ID号住院号

姓名年龄性别职别单位

手术中冰冻切片病理检查是将切下的病变组织在冰冻切片机中迅速冷冻后制成病理切片，由病理医师即刻在显微镜下检查，做出病现诊断，主要目的是：（1）帮助判断病变的性质。如：炎症、肿瘤或其它性质的病变；如果是肿瘤，则需进一步判断是良性还是恶性肿瘤。（2）帮助判断切除肿瘤组织的边缘是否有残留的癌组织。（3）帮助辨认手术切除组织。

（4）判断手术切除的淋巴结中有无转移的癌细胞。冰冻切片病理诊断结果作为术中会诊意见提供给临床医生，临床医生将其作为重要的参考依据决定进一步手术的方式和范围。与常规石蜡包埋切片相比，冰冻切片诊断的局限性是：（1）冰冻切片质量较差，诊断准确率低于常规石蜡切片。（2）在做冰冻切片采取活检组织时，有造成肿瘤种植的可能，特别是在甲状腺和肺等实质器官。（3）术中冰冻切片技术不适用于脂肪组织和骨组织。（4）某些疑难病例和交界性病例有时在石蜡切片诊断都很困难，需要做免疫组化和电镜观察，仅凭冰冻切片难以确定诊断，因而要延缓病理诊断。（5）冰冻切片取材局限，有时局部的组织不能代表整个标本。因此，有的病例冰冻切片组织象和手术切除大标本的石蜡切片组织象相差很远，甚至造成假阴性诊断。（6）病变组织在冷冻过程中不可避免地形成冰晶，以及组织处理和诊断时间紧迫等技术因素所限，“冰冻”诊断的准确率有一定的局限性，有可能与最终的“常规”病理切片诊断不相符合，最后病理诊断应以“常规病理诊断为准”。

医师签名：年月日

我已仔细阅读并了解上述关于“冰冻”切片病理诊断的作用及其局限性，同意对实施手术中切除的病变组织进行冰冻切片快速病理检查。

患者本人签字：

代表签字：（与患者关系：）

年月日

4.术中快速冰冻切片技术工作制度 篇四

1 方法

1.1 染液

(1) Harris苏木紫液[1]95 m L

冰乙酸5 m L

(2) 伊红Y (醇溶性) 0.02 g

无水乙醇100 m L

1.2 染色步骤

(1) 玻片入苏木紫液1 min~2 min

(2) 水洗一下

(3) 0.1%Na OH 2 s~3 s (一过性)

(4) 水洗数秒

(5) 伊红Y 30 s

(6) 二甲苯Ⅰ30 s

(7) 二甲苯Ⅱ1.5 min

(8) 树胶封固

2 结果

用苏木紫-伊红快速染色法制作的标本, 组织、细胞形态和结构清晰, 细胞核、细胞质显色良好, 可与常规的快速苏木紫-伊红制片标本相媲美。

3 讨论

3.1 关于冰冻切片的固定问题

固定的目的是通过固定剂的作用, 使细胞代谢停止, 迅速死亡, 避免细胞中溶酶体成分的破坏作用使细胞自溶, 改变活体时的形态和结构特点。苏木紫-伊红快速染色法舍弃了固定剂固定这一特殊步骤, 是因染色剂苏木紫液中加入最终浓度为5%的冰乙酸, 在染细胞核和核外染色质的同时, 冰乙酸可使构成细胞的蛋白质变性, 代谢停止, 活性丧失致细胞死亡, 并紧紧地黏附在玻片上, 保持了细胞在活体时的形态和结构特点, 起到了对组织细胞特设的单独固定作用, 并使细胞核和核外染色质着色良好, 便于镜下观察。

3.2 关于组织细胞的染色、脱水问题

常规苏木紫-伊红染色法均是退行性染色法[2], 苏木紫染色后要进行分化处理, 使构成细胞核的过染的染色质着色适中, 并使已着色的细胞质脱色。我们在苏木紫液中加入5%冰乙酸, 不仅对组织细胞起到了很好的固定作用, 保持了组织细胞活体时的形态和结构特点, 也使细胞核和核外染色质着色良好。构成细胞质的蛋白质等电点大多数接近于p H 5.0, 所以在人体体液p H 7.4的环境中大多数蛋白质能离解成带负电荷的阴离子[3], 这样就易与带正电荷的碱性 (阳离子) 染料———苏木紫相结合, 使细胞质着色, 所以常规苏木紫-伊红染色后要进行分化这一步骤。我们在哈瑞苏木紫液内加入冰乙酸, 使苏木紫液的p H<5.0, 使其处在p H

转化后的细胞质不着色、细胞核不过染, 所以在苏木紫染色后就不需要分化处理, 可以直接返蓝。由于伊红Y是带负电荷的酸性 (阴离子) 染料, 很易与带正电荷 (NH3+) 蛋白质结合而使细胞质着色[2], 这样细胞核、细胞质显色良好、结构清晰, 便于观察。由于苏木紫液内冰乙酸对组织细胞的固定作用, 使细胞紧紧地黏附在玻片上, 勿需梯度脱水也不会使细胞的形态和结构特点发生改变;玻片直接放入用无水乙醇配制的伊红液内, 伊红染色后直接进入二甲苯洗涤、透明, 树胶封固镜检。这样使整个染色过程减少了许多步骤, 缩短了制片时间, 仅用5 min (常规冰冻切片染色时间约10 min) 即可镜检, 给及时为临床提供诊断信息创造了良好的条件, 真正起到了快速诊断的作用 (见图1、图2) 。

摘要：探讨冰冻切片苏木紫-伊红快速染色法, 为临床及时提供诊断信息。苏木紫-伊红快速染色方法制作出的标本, 细胞形态和结构清晰, 细胞核、细胞质显色良好, 染色过程快, 仅5 min后即可镜检, 可及时为临床提供送检标本性质。

关键词：冰冻切片,细胞,快速染色,苏木紫-伊红

参考文献

[1]孟睿朝.组织病理标本制作法[M].北京:人民卫生出版社, 1995:85.

[2]王德田, 董建国.实用现代病理学技术[M].北京:中国协和医科大学出版社, 2012:63-64、483.